Cette séance de TP s’articule autour de deux grandes parties. La première consiste à effectuer un challenge test sur un produit cosmétique (produit B, rouge). Cette technique permet de démontrer l’efficacité antimicrobienne d’un conservateur en infectant volontairement le produit avec un microorganisme connu et de concentration connue. Les microorganismes utilisés selon la pharmacopée française pour le challenge test cosmétique sont : Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa et Staphylococcus aureus pour les bactéries ; Aspergillus niger et Candida albicans pour les champignons. J’effectuerai dans ce TP le challenge test avec C.albicans.

Dans la deuxième partie du TP, j’aurai pour objectif d’identifier un champignon (boite n°12) en l’analysant tant sur l’aspect macroscopique que microscopique et en donnant ses caractéristiques.

Challenge test

Cette technique se réalise en deux étapes.

Dénombrement de la flore totale de l’échantillon.

Pour cela il suffit d’ensemencer sur boites gélosées, 0.1 mL de l’échantillon à différentes concentration : pur, dilué au 10ème et au 100ème. Les dilutions s’effectuent simplement en prenant 1mL de la solution mère que l’on introduit dans un tube d’eau physiologique de 9mL (même principe pour la dilution -1 ( -2). Si à l’issu de ce test, on dénombre plus de 103 germes/mL, il est inutile de poursuivre le challenge test car la qualité du conservateur est insuffisante.

Résultats : après 24h à 37°C, il n’y a de colonies sur aucunes des boites. L’échantillon est donc propre microbiologiquement et le challenge test peut continuer.

Préparation de l’inoculum et infection

L’objectif est d’inoculer l’agent infectieux (ici C.albicans) avec un volume inférieur ou égal à 1% du volume du produit pour obtenir une suspension de 105 germes/mL.

La souche de C.albicans est initialement à 108 germes/mL, il faut donc d’abord effectuer une première dilution au 10ème (1mL dans 9mL d’eau physiologique) pour obtenir une solution