Chromotagraphie

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  • Publié le : 8 mai 2011
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CHROMATOGRAPHIE DES SUCRES
1. But du TP

Comprendre le principe d’une chromatographie sur couche mince ( CCM ).
Comparer la CCM obtenue à partir d’un jus d’orange à celles obtenues à partir desolutions de sucre.

2. Principe de la CCM

La chromatographie sur couche mince est une technique de séparation d’un mélange liquide ou gazeux par passage dans une matière poreuse ou divisée.
Ondistingue une phase stationnaire ( le gel de silice déposé en couche d’épaisseur uniforme sur un support rigide ) et une phase mobile ( un solvant appelé éluant dont la nature dépend des constituants àséparer ).
On dépose un échantillon du produit à analyser sur la plaque recouverte de gel de silice puis on place la plaque dans une cuve contenant l’éluant. Celui-ci progresse dans la phasestationnaire ( essentiellement par capillarité ).
Chaque composant de l’échantillon est entraîné par l’éluant avec une vitesse qui lui est propre.

3. Mode opératoire

a. Préparation des solutions

•Préparer une solution de glucose à 6 g.L-1 , une solution de fructose à 12 g.L-1 et une solution de saccharose à 12 g.L-1 par dissolution de ces sucres dans de l’eau déminéralisée. On utilisera desfioles jaugées de 50 mL.

b. Dépôt des échantillons sur la plaque

• A l’aide d’un tube capillaire, déposer une très petite goutte de chaque solution préparée ainsi que 1e jus d’orange sur laplaque de chromatographie en suivant le schéma ci-contre.

ATTENTION : les taches obtenues doivent avoir un diamètre de l’ordre de 3mm. Il faut tenir la plaquepar les bords.
[pic]

Sécher puis recommencer l’opération pour augmenter la quantité de sucre déposé, ( bien superposer les taches ) : faire ainsi 3 dépôts successifs en séchant entre chaque.

c.Préparation de la cuve chromatographique

Verser l’éluant ( mélange de 6mL de butanone, de 2mL d’éthanol et de 2mL d’acide éthanoïque pur ) dans une cuve à élution sur une hauteur de 0,5 cm. Fermer...
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