TP PHYP : L’autotrophie en azote chez les plantes supérieures

SOMMAIRE

Introduction Zoé :

Problématique : Quel est l’action de la lumière sur l’activité nitrate réductase sur les végétaux ?

I- Protocole expérimental

Dans un 1er temps il est nécessaire de réaliser l’extraction de l’enzyme pour les 3 lots que nous avons étudié :
Lot 1 : Lumière + arrosage régulier avec une solution contenant du NO3-
Lot 2 : Lumière + arrosage régulier avec une solution sans NO3-
Lot 3 : Lumière + arrosage régulier avec NO3- mais 2 derniers jours à l’obscurité

1- Pour réaliser l’extraction enzymatique :

Figure : Schéma synthétique de l'extraction des enzymes

Une fois le Broyat filtré il est nécessaire de le placer dans la centrifugeuse ce qui va nous permettre d’obtenir deux phases : le liquide surnageant qui est l’extrait enzymatique et le culot est composé du reste des débris du végétal.

2- Réalisation de la Gamme étalon : 1 2 3 4 5 6 7 8 9

Ajout dans chaque tubes de 1 mL de Sulfanilamide+ 0,3 mL NED (réactif)

Quantité de NO2- par tube

A partir de la Gamme étalon nous avons réaliser la courbe étalon, le R² de cette courbe est de 0,963, un résultat proche de 1 est attendu pour une plus grande précision. Dans notre cas le résultat du R² est un peu bas, ce qui aura une influence sur la précision des résultats finaux.
Réalisation de la Gamme à partir de nos 3 lots pour mesurer l’activité nitrate réductase :
Pour cette gamme composée de 16 tubes, nous allons les séparer celon les lots initiaux :
Lot 1 : Tubes 1 à 6B
Lot 2 : Tubes 7 à 11
Lot 3 : Tubes 12 à 16

Figure : Schéma récapitulatif de la préparation de la gamme nitrate réductase
Temps relatif aux différents lots :