Compte rendu tp microbiologie

Disponible uniquement sur Etudier
  • Pages : 5 (1160 mots )
  • Téléchargement(s) : 0
  • Publié le : 24 mars 2013
Lire le document complet
Aperçu du document
Streptocoques et autres coques lactiques.

Introduction
Le but de ce TP est d’identifier une souche bactérienne de la famille des Streptococcaceae.
Pour cela, nous réaliserons différents tests, sur différents milieux, pour identifier les caractères de notre bactérie, et ainsi la reconnaître.
La souche bactérienne utilisée sera la souche n°2 en gélose inclinée.

Milieux Gelosés pourl’isolement des streptocoques.

Matériel et methode
* Couler en boite de pétri : *un milieu KF : -> faire fondre 2 tubes de milieu au Bain-marie à 100°C puis laisser refroidir vers 55°C.
-> Ajouter 2 gouttes de TTC à1% à la pipette pasteur déboutonnée (0,1mL)
-> Mélanger et couler en boite de Pétri.
* un milieu de Slanetz et Bartley (2 boites dePétri)
* une gélose à la bile, esculine et azide de sodium.
* Réaliser un isolement sur chacune des boites avec la méthode de votre choix (ici, technique de buttiaux utilisée). Les deux bactéries seront traités.
* Incuber à 37°C pendant 48 heures.

*
Observations, Résultats

Milieux | Caractéristiques des milieux | Observation et interprétation(aspect et couleurdes colonies développées) |
Milieu KF | Inhibiteurs : Azide de sodiumSucre(s) : LactoseIndicateur de Ph : Pourpre de BromocrésolSélectionne : les Streptocoques. | Bactérie 1 : colonies rouges-roses-> suspicion streptocoquesBactérie 2 : petites colonies rouges -> suspicion entérocoque E.faecalis et E.faecium. |
Milieu de Slanetz et Bartley | Inhibiteurs : Azide de sodiumSucre(s) :LactoseIndicateur de Ph : Pourpre de BromocrésolSélectionne : Streptocoques. | Bactérie 1 : petites colonies roses- rouges.Bactérie 2 : petites colonies rouges. |
Gélose à la bile, esculine et azide de sodium. | Inhibiteurs : Bile, Azide de sodium.Sucre(s) : EsculineIndicateur de Ph : Sélectionne : Streptocoques. | Bactéries translucides pour les 2 souches -> suspicion Entérocoques. |
*Attention : les entérocoques, comme les streptocoques, peuvent se développer sur ces 3 milieux.

Techniques d’identification.
*
Matériel et methode

* Réaliser une coloration de Gram (traiter les 2 souches)
* Réaliser une recherche de la catalase (traiter les 2 souches)
-> Déposer une goutte de H2O2 sur une lame et déposer la bactérie.
* Réaliser un test de résistance à lachaleur:
-> Ensemencer un bouillon Cœur-Cervelle (BHI) avec anse de culture.
->Placer 30 min au Bain-marie à 63°C.
->Refroidir immédiatement sous l’eau du robinet.
->Incuber à 37°C pendant 48h.

* Réaliser un ensemencement en milieu hypersalé(6,5% NaCl) :
->Ensemencer un bouillon Hypersalé 6,5% NaCl en dissociant une anse de culture.
->Incuber à 37°C pendant 48heures.

* Réaliser un ensemencement sur une Gélose à la bile de Bœuf :
->Faire fondre le milieu à la bile.
->Couler en boite de Pétri.
->Réaliser un ensemencement en réalisant des stries espacées.
-> incuber à37°C pendant 48 heures.

* Réaliser un ensemencement en bouillon au tellurite de Potassium :
->Ensemencer avec une anse de culture.
->incuber à37°C pendant48 heures.

* Etude des propriétés technologiques ->culture en lait tournesolé :
->Ensemencer une anse de culture.
->Incuber à 37°C pendant 48 heures.

* Mettre en évidence le type hémolyse :
-> Faire fondre 12mL de base gélosée
->Laisser refroidir vers 50°C
->Ajouter 0,6 mL de sang de Cheval. (Ne pas vortexer)
->couler en boite de pétri.
->Ensemenceren faisant des stries espacées.
->Incuber à 37°C pendant 48 heures.

* Dénombrement des Streptocoques et enterocoques fécaux -> Methode NPP :
->Diluer une eau de marre jusqu’à 10-3 : 90mL d’eau distillée stérile (en flacon) + 10mL de l’eau à analyser.
->Ensemencer 12 tubes de milieu de Rothe à double concentration avec 10 mL d’eau pure (=eau non diluée), 10-1, 10-2, 10-3,...
tracking img