Imbaud Olivier
Richer Julien

TP CHIMIE ANALYTIQUE :
Compte rendu HPLC

I. Matériel et méthode :

La phase mobile pompée dans les réservoirs de solvant parcourt en permanence le chromatographe. Elle est traitée par un dégazeur qui permet d’éliminer les molécules de gaz qui fausseraient les mesures en passant dans la colonne.
Une pompe délivre en continu avec une pression constante la phase mobile dans le système d’analyse. La pression est définie par les propriétés de la colonne (débit, stabilité, pression maximal)

L’injecteur permet d’introduire l’échantillon à analyser dans le circuit sans en modifier la pression. Ceci grâce à une vanne à boucle d’échantillonnage de capacité fixe (10, 20, 50 µL…). Possédant 2 positions, l’une permet le remplissage de la boucle d’injection avec un volume fixe (load), le second met en circulation l’échantillon dans le système chromatographique (inject). Le remplissage de la boucle d’injection se fait à l’aide d’une seringue, ou avec un système automatique d’injection.
Les solutés sont injectés dans la colonne. Leurs différentes vitesses de déplacement à l’interieur de la colonne aussi appelé temps de rétention permettent leur élution et leur séparation.
Un détecteur va suivre en continu l’apparition des solutés. ici nous utiliserons un spectrophotomètre UV-visible (190-600 nm).

II. CALCULS ET RESULTATS :

Calcule du volume mort de la colonne :
Soit 150 = 1.495 ml

INFLUENCE COMPOSITION DE L’ELUANT :
Résultats :

Séparation d’un Mélange Théophylline/Caféine en fonction de la concentration en éluant:
% acétonitrile
Pression
Tr 1
Tr2
N (Tr1)
N(Tr2)
Résolution
15%
117 bar
2.071
2.786
6082.89
8135.85
6.22
18%
115 bar
2.435
3.631
6627.69
9410.45
8.9
21%
112 bar
1.857
2.342
7491.19
7803.05
5.07

On voit que la résolution la plus grande correspond à une proportion d’acétonitrile de 18%. La résolution donne une mesure quantitative de l’aptitude d’une colonne à séparer deux solutés :
R < 1 : mauvaise résolution
1 < R < 1,4 :