Culture cellulaire

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  • Publié le : 30 janvier 2010
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Une courbe d’étalonnage
Il est maintenant possible d'établir la relation entre le nombre de cellules par mL de suspension et l'absorbance (ou de la transmitance) du milieude culture. Il suffit pour cela de compter pour chaque dilution de référence, dont on a mesuré l'absorbance, le nombre correspondant de cellules par mL.
On peut ainsi construire la courbe traduisantles variations de la concentration en nombre de cellules par mL en fonction de l'absorbance (ou de la transmitance) du milieu.

La mesure du nombre de cellules
La variation de concentrationexprimée en grammes par litre informe sur la croissance d'une population cellulaire. On peut toutefois désirer connaître de manière plus précise le nombre de cellules par litre correspondant à chaqueconcentration. Il est alors nécessaire de réaliser un comptage au microscope.
Pour cela, on place une goutte de suspension sur une lame porte-objet spéciale finement quadrillée. Lorsque la lamelle est poséesur la préparation, on sait que chaque carré visible au microscope correspond à un volume précis de suspension, 5.10-4 µL par exemple. Il suffit alors de compter le nombre moyen de cellules par carré.Le nombre de cellules par litre est obtenu en multipliant cette valeur par 2.109 (en effet, 5.10-4 X 2.109 = 1 000 000 µL = 1 L).
Remarque 1 : Un tel comptage n'est possible que sur des suspensionssuffisamment diluées pour que les cellules ne soient pas trop nombreuses dans le champ du microscope. Si la suspension est trop concentrée, on la dilue avant de faire le comptage et le chiffre mesuréest multiplié par le facteur de dilution (si la suspension a été diluée 10 fois, le résultat du comptage est multiplié par 10).
Remarque 2 : Pour éviter de compter deux fois des cellules chevauchantle quadrillage, on compte uniquement les cellules qui « mordent » sur les côtés droit et inférieur de chaque carré.

La mesure de l’absorbance et de la transmitance
Le principe général de la...
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