Les Observations microscopiques
(Etat frais et mobilité, colorations)

Etudier la morphologie microbienne, au microscope photonique, c’est rechercher la forme des bactéries et leur mode de groupement.

Ces renseignements peuvent être fournis par une simple préparation à l’état frais entre lame et lamelle, les bactéries étant alors observées vivantes, ou par l’observation d’un frottis coloré.

Les examens microscopiques de prélèvements peuvent fournir des informations très précieuses pour le diagnostic et le traitement d’une infection. Dans tous les cas, ils orientent le diagnostic, le choix des milieux de culture et les conditions d’incubation.

A partir d’une souche pure, c’est le premier critère d’identification.

Les examens microscopiques d’un prélèvement polymicrobien permettent enfin de connaître les proportions de chaque sous-population dans le prélèvement.

I Observation à l’état frais

Une préparation à l’état frais permet d’examiner la mobilité des bactéries et d’en déceler la forme, bien que ce renseignement soit plus accessible sur des frottis colorés. Si la bactérie est sporulée, l’état frais permet également de mettre ce phénomène en évidence. Pour observer la mobilité, on doit prendre garde à ne pas détruire les flagelles bactériens lors du prélèvement et de la préparation de la lame.

Technique de la préparation de l’état frais

Déposer une petite goutte d’eau stérile sur la lame.
Prélever une fraction de colonies sur gélose, de préférence aux bords de celle-ci (ou prélever une petite goutte de bouillon). Faire une suspension homogène dans la goutte d’eau en incorporant progressivement l’inoculum et en remuant très délicatement (afin de ne pas casser les flagelles).
Recouvrir d’une lamelle en évitant d’enfermer des bulles d’air. Le liquide ne doit pas déborder (sinon jeter la lame dans une solution désinfectante et recommencer).
Observer rapidement à l’objectif 40 en mettant la lumière au maximum mais en fermant le