ED génome –correction.

1° PCR = reproduction d’un segment d’ADN choisi en plusieurs fois et de façon exponentielle. Amplification exponentielle d’un segment d’ADN spécifique, défini par deux amorces à chaque extrémité. On utilise pour cela la Taq polymérase qui fonctionne à de hautes températures ; on ajoute des bases de façon complémentaire à partir d’amorces toujours dans le sens 5’  3’. On a également besoin de dNTPs.
La longueur de chaque segment d’ADN est définie par les amorces (une dans chaque sens car il y en a une pour chaque brin).

Dénaturation du double brin d’ADN pour donner deux brins séparés
Hybridation des amorces sur l’ADN (appariement des bases complémentaires)
Extension ou élongation – recopie de façon complémentaire à partir des amorces.
L’amplification est exponentielle car on utilise le produit de chaque synthèse comme matrice pour les étapes suivantes.

La migration sur gel d’agarose permet de séparer les fragments d’ADN en fonction de leur taille (les petits fragments migrent plus que les grands). Logiquement l’ADN doit migrer vers le pôle + car il est négatif. Ici on s’attend à une seule bande de taille définie au départ par les amorces.
(159 pb + 552 pb + 151pb =867pb).

2° Un plasmide est un vecteur de clonage de petite taille d’origine bactérienne. Il correspond à de l’ADN circulaire extra chromosomique présentant une origine de réplication (il se sert de la bactérie dans laquelle il est pour se répliquer). Le plasmide possède également des sites des restrictions correspondant à des sites de reconnaissance pour des enzymes des restrictions (cela permet d’insérer ce que l’on veut étudier).
On va insérer le plasmide dans une bactérie. Certaines vont l’insérer d’autres non. Pour faire le tri, on se sert de la présence d’une séquence de résistance à un antibactérien contenue dans le plasmide. En ajoutant un antibactérien, seules les bactéries n’ayant pas intégré le plasmide seront tuées. Ne poussent que les bactéries