Etude de la beta galactosidase

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  • Publié le : 17 mai 2010
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Étude de la β-galactosidase

1) Sommaire :

1) Sommaire : 1
2) Résumé : 2
3) Introduction : 3
4) Matériel et méthodes : 5
a. Détermination de coefficient d’extinction molaire de l’ONP, vitesse de réaction et paramètres cinétiques vis-à-vis de l’ONPG de l’enzyme soluble : 5
b. Etude de l’influence de la concentration en enzyme soluble et détermination de la vitesse deréaction et des paramètres cinétiques vis-à-vis de l’ONPG de l’enzyme immobilisée : 5
c. Détermination de la vitesse de réaction et des paramètres cinétiques vis-à-vis du lactose de l’enzyme soluble et étude de l’influence d’un effecteur chimique (ONPG) : 6
d. Détermination de la vitesse de réaction et des paramètres cinétiques vis-à-vis du lactose de l’enzyme immobilisée et étude de l’influenced’un effecteur chimique (ONPG) : 7
e. Etude de l’influence du pH et du méthyl- β-galactopyranoside sur les enzymes solubles et immobilisées : 7
f. Etude de l’influence de la température et du galactose sur les enzymes solubles et immobilisées : 7
5) Résultats : 8
a. Détermination de coefficient d’extinction molaire de l’ONP, vitesse de réaction et paramètres cinétiques vis-à-vis del’ONPG de l’enzyme soluble : 8
b. Etude de l’influence de la concentration en enzyme soluble et détermination de la vitesse de réaction et des paramètres cinétiques vis-à-vis de l’ONPG de l’enzyme immobilisée. 13
c. Détermination de la vitesse de réaction et des paramètres cinétiques vis-à-vis du lactose de l’enzyme soluble et étude de l’influence d’un effecteur chimique (ONPG) : 18
d.Détermination de la vitesse de réaction et des paramètres cinétiques vis-à-vis du lactose de l’enzyme immobilisée et étude de l’influence d’un effecteur chimique (ONPG) : 24
e. Influence d’effecteurs physiques et chimiques (pH et méthyl-β-D-galactopyranoside) sur les β–galactosidases solubles et immobilisées 30
f. Influence d’effecteurs physiques et chimiques (température et galactose) 42
6)Discussion : 56
7) Bibliographie : 60
8) Annexes : 61
a. Détermination de coefficient d’extinction molaire de l’ONP, vitesse de réaction et paramètres cinétiques vis-à-vis de l’ONPG de l’enzyme soluble : 61
b. Etude de l’influence de la concentration en enzyme soluble et détermination de la vitesse de réaction et des paramètres cinétiques vis-à-vis de l’ONPG de l’enzyme immobilisée.69
c. Détermination de la vitesse de réaction et des paramètres cinétiques vis-à-vis du lactose de l’enzyme soluble et étude de l’influence d’un effecteur chimique (ONPG) : 77
d. Détermination de la vitesse de réaction et des paramètres cinétiques vis-à-vis du lactose de l’enzyme immobilisée et étude de l’influence d’un effecteur chimique (ONPG) : 86
e. Étude de l’influence du pH et duméthyl- β-galactopyranoside sur les enzymes solubles et immobilisées : 95
f. Influence de la température sur la β-galactosidase soluble en présence de l’ONPG : 117

2) Résumé :

Dans cette étude, nous avons déterminé l’influence de différents facteurs physico chimiques sur l’activité d’une enzyme : β-galactosidase. Par différentes expériences, la température, le pH, la concentration ensubstrat et en effecteur (galactose, méthyl- β-galactopyranoside), l’immobilisation ou non de l’enzyme ont permis de déterminer les conditions optimales d’utilisation de cette enzyme en particulier. Nous avons également identifié les méthodes de calculs graphiques les plus pertinentes dans le cadre de nos protocoles.
A l’issue de cette étude, un pH, une température et différentes concentrations ensubstrat optimaux ont pu être dégagés ainsi que différents autres paramètres comme l’nfluence d’effecteurs sur l’activité de l’enzyme.

3) Introduction :
Les enzymes sont des molécules ou ensemble de molécules protéiques (ou ARN dans le cas du ribozyme) qui catalysent une réaction biochimique en abaissant forte son énergie d’activation. Leur particularité réside dans leur capacité à...
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