Ezio Auditore Da Firenze, né en 1459 fut un noble florentin durant la Renaissance Italienne, et à l'insu de la quasi-totalité des historiens et philosophes de l'époque, fut un membre important de l'Ordre Des Assassins. Descendant d'Altaïr Ibn-La'Ahad et ancêtre de Desmond Miles et du sujet 16, il aura laissé une marque importante dans l'histoire durant sa lutte contre l'ordre des Templiers.

Il naquit en 1459 après J.C, étant le second fils de Giovanni Auditore et de Maria Auditore. Jusqu'à l'âge de 17 ans, il menait une vie luxueuse dans les branches de la noblesse florentine tout en n'ayant aucune idée de l'allégeance de son père à l'Ordre Des Assassins. Durant ce temps son père, un banquier florentin l'initiait au monde de la finance. Mais, Giovanni, son père, est victime d'un complot. Son père et ses frères sont exécutés. Ezio, portant les habits et les armes de son pères, à soif de vengeance. Pendant 12 ans, il va être initié à devenir un assassin, et pendant 23 ans, il va tenter d'assouvir sa soif de vengeance en tuant ceux qui l'ont trahis et tués sa famille et de sauver l'Italie de la corruption.

L'action se déroulera à la fin du XVème siècle durant la Renaissance en Italie. Pendant l'aventure, Ezio rencontrera de nombreux personnages influents de l'époque tel que l'inventeur de génie Leonardo da Vinci (Léonard de Vinci) qui deviendra son ami, le célèbre Machiavel, ainsi que des membres de la famille de Médicis.

Au début de l'aventure Ezio n'aura qu'une armure de cuir, au fil des missions et de l'argent gagné, il pourra se procurer de l'équipement neuf et plus sophistiqué et/ou résistant, comme par exemple, une armure d'acier, ceci aux choix du joueur. Selon les développeurs, on pourra même changer la couleur des vêtement du héros, cela ne changera rien à l'aventure, mais ajoutera une touche de style, déjà bien présente dans le précédent opus: premier du nom Grâce à Léonard de Vinci, qui sera l'ami d'Ezio, on pourra obtenir de nouvelles armes,