Travaux pratiques de physiologie animale – Janvier 2011

HEMATOLOGIE

1 But de la manipulation
Ø Détermination de la valeur de l'hématocrite. Ø Numération des globules rouges et blancs contenus dans 1mm3 de sang.

2 Principe
• L’hématocrite est déterminé par centrifugation d'une quantité précise de sang (tubes a hématocrites calibrés); • on exprime le rapport masse cellulaire / plasma par lecture

directe sur le tube (le résultat est exprimé en %). Le principe de la numération sanguine est basé sur la dilution du sang et le comptage des cellules : 1 mm3 de sang est dilué 1OO fois grâce à une solution de HAYEM pour les hématies et 1O fois pour les globules blancs en utilisant la solution de LAZARUS. Le comptage est réalisé sous microscope en utilisant une cellule de numération dotée d'une cuvette microscopique de 1 mm3 de volume et dont le fond est quadrillé en carrés.

3 Mesure de l'hématocrite.
Utiliser les tubes capillaires de type micro-hématocrite, ils comportent deux repères colorés (figure 1). Plonger l’une des extrémités dans le sang rendu incoagulable, le sang monte par capillarité. Ajuster exactement les niveaux aux repères colorés et boucher les extrémités à l’aide de pâte à modeler. Mettre le tube dans la centrifugeuse pendant 1O minutes. Lire le niveau atteint par le culot : utiliser pour cela le gabarit de lecture en faisant coïncider les repères du tube avec ceux du gabarit.

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Figure 1 : Remplissage et préparation des tubes à hématocrite

Calculer la valeur de l'hématocrite suivant la relation :

H (en %) = (Niveau du culot)/(Hauteur globale) x 100

4 Numération globulaire
La cellule de Malassez :

La gravure d'une lame de Malassez se

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compose d'un certain nombres de traits, délimitant en fait, 100 grands carreaux, dont certains sont subdivisés en 20 petits carreaux Longueur = 0,25 mm Largeur = 0,20 mm