Les chromosomes artificiels

1493 mots 6 pages
Chromosomes artificiels de levure (YAC)

Dans les organismes supérieurs, certaines unités génétiques sont plus grandes que 50 kb. Par exemple, le gène du facteur VIII chez l'homme qui code le facteur de coagulation du sang dépasse 190 kb et le gène défectif dans la dystrophie musculaire de Duchenne à une taille de 2.300 kb.

D'autre part, on s'intéresse de plus en plus à une cartographie globale du génome humain. Cette cartographie est d'autant plus rapide que les inserts sont plus grands.

On a développé un système de clonage qui est basé sur la construction in vitro de molécules d'ADN linéaires qui peuvent être introduites dans des levures Saccharomyces cerevisiae, où ces molécules se maintiennent sous la forme de chromosomes artificiels (YAC ou Yeast Artificial Chromosomes).

Pratiquement, le système consiste à lier in vitro un plasmide et des fragments d'ADN de mammifère et à transformer ces molécules d'ADN recombinant dans des levures. Le plasmide porte les unités fonctionnelles principales des chromosomes de levure (fig1) :

-un centromère (CEN4) qu'on trouve sur chaque chromosome et qui assure une réplication stable et la précision de la répartition des chromosomes lorsque les cellules se divisent.

-une séquence de réplication autonome (ARS ou Autonomous Replicating Sequence) qui permet aux YAC de se répliquer comme des molécules autonomes, c.-à-d. sans s'intégrer dans un chromosome naturel de levure

-deux séquences indispensables à la formation des télomères (TEL). Ces séquences TEL se trouvent aux extrémités des chromosomes et permettent aux YAC de se répliquer sous forme de molécules linéaires

-des marqueurs de sélection métabolique

-des sites de clonage

fig 2 le palsmide pYAC2

La digestion par BamHI et SmaI du vecteur présenté à la fig. 2 donne 3 fragments :

-un fragment qui peut être considéré comme un bras gauche de chromosome et qui porte le centromère, la séquence de

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