Milieu de culture

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  • Publié le : 25 mars 2011
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Gélose MSRV (ISO 6579)

DOMAINE D’UTILISATION La gélose de Rappaport-Vassiliadis semi-solide modifiée (MSRV) est un milieu sélectif, historiquement utilisé pour l'isolement des Salmonella dans les produits de chocolaterie et les autres produits alimentaires. Elle est également très utilisée dans le domaine de la santé animale : chez les mammifères, les oiseaux et dans l’environnement desproductions animales.

HISTORIQUE Développée par De Smedt et al, la composition du milieu dérive de celle du bouillon de RappaportVassiliadis, rendu semi-solide par adjonction d'une faible quantité d'agar. Sa sélectivité est réajustée par abaissement du taux de chlorure de magnésium présent dans ce bouillon et ajout de novobiocine à hauteur de 10 mg/L. La gélose MSRV (ISO 6579) entre dans le protocolede recherche des salmonelles dans le cadre des prélèvements réalisés dans l’environnement (matières fécales animales et échantillons environnementaux) des filières de production animale (élevages, couvoirs), ainsi que dans celui de la mise en évidence des salmonelles chez les oiseaux (œufs à couver, prélèvements d’organes) et chez les mammifères.

PRINCIPES - L'efficacité bactériologique estfondée sur la capacité des salmonelles à migrer de façon sélective dans le milieu. - Les bactéries contaminantes sont inhibées par la forte concentration en chlorure de magnésium, ainsi que par la présence de vert malachite. - La Novobiocine permet d'inhiber la plupart des microorganismes à Gram positif et d'éviter le développement des Proteus. - Les Salmonella produisent un halo opaque, témoin dela culture. - Le milieu est ensemencé directement à partir d'un milieu de pré-enrichissement (Eau peptonée tamponnée, en simple ou double concentration), préalablement incubé à (37 ± 2)°C pendant (18 ± 2) heures. Si l’échantillon à tester est suspecté de contenir un élément inhibiteur de la croissance bactérienne ou lorsqu’on opère un contrôle de désinfection/nettoyage, il pourra être utiled’ajouter au milieu de pré-enrichissement des neutralisants de désinfectants. - Le milieu ne convient pas pour les salmonelles immobiles (Salmonella Gallinarum et Pullorum). Si la présence de telles salmonelles est suspectée, les cultures obtenues sur le milieu de préenrichissement doivent être repiquées sur les milieux appropriés, en suivant les procédures adaptées.

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PREPARATION - Mettre en suspension 31,7 g de milieu déshydraté (BK191) dans 1 litre d'eau distillée ou déminéralisée. - Porter lentement le milieu à ébullition sous agitation constante et l’y maintenir durant le tempsnécessaire à sa dissolution. Une liquéfaction partielle de l’agar entraînera inévitablement une altération significative de la consistance du gel du milieu solidifié, après ébullition et refroidissement. - Ne pas autoclaver. - Si la présentation prête-à-liquéfier (BM127) est utilisée, faire fondre la gélose pendant le minimum de temps nécessaire à sa reliquéfaction totale. - Ne pas répéter cette opérationplus d’une fois.

MODE D’EMPLOI Refroidir et maintenir le milieu à 44-47°C. Couler en boîtes de Petri stériles. Laisser solidifier sur une surface froide. Ne pas sécher les boîtes ainsi préparées. Ensemencer trois gouttes (environ 0,1 mL) de la culture provenant d'un milieu de préenrichissement, au centre d’une boîte de milieu. - Incuber à (41,5 ± 1,0)°C, pendant (24 ± 3) heures, sans retournerles boîtes. Au constat de l’absence de migration en 24 heures, l’incubation sera prolongée de (24 ± 3) heures supplémentaires. - La température d’incubation ne devra jamais être supérieure à 43°C. -

LECTURE Le développement d'un halo opaque blanchâtre centré sur le point d'ensemencement indique présomptivement la présence de Salmonella. Des subcultures peuvent être réalisées en prélevant...
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