Compte Rendu TP
ETUDE DE LA CHAÎNE RESPIRATOIRE

BUT

Le but de ce TP est d'étudier le fonctionnement de la chaîne respiratoire de mitochondries. Le foie étant un tissu particulièrement riche en mitochondrie, nous l'utiliserons pour cette étude. Pour comprendre le fonctionnement de la chaîne respiratoire, nous utiliserons un oxygraphe pour suivre l'évolution de la concentration en oxygène au cours du temps.
La chaîne respiratoire est localisée dans la membrane interne mitochondriale. Cette chaîne de transport d'électrons est constituée de quatre complexes enzymatiques :

• complexe I : NADH déshydrogénase
• complexe II : succinate déshydrogénase
• complexe III : cytochrome b-c1
• complexe IV : cytochrome c oxydase

La chaîne respiratoire permet de réoxyder les coenzymes NADH et Ubiquinone réduits au cours du cycle de Krebbs. Cette réoxydation s'accompagne de la création d'un gradient transmembranaire de protons qui va servir à fabriquer de l'ATP, molécule énergétique universelle.

Lors du transfert des électrons de l'ensemble de la chaîne de transport d'électrons, on concidère que:

• Le premier donneur de protons et d'électrons (NADH + H+) • Le dernier accepteur d'électrons (l'oxygène moléculaire, O2 pour former 1mole d’H2O)

Matériel et méthodes

• Préparation de la suspension mitochondriale:
Dans ce TP, on utilise des mitochondries fraîches extraites à partir d'un foie de rat.
Après une série de centrifugation, on récupère le culot qu'on suspend dans un tampon.

Manipulations

Pour ces expériences, on utilise un oxygraphe. Il s'agit d'un appareil de mesure qui utilise une électrode à dioxygène constituée par une cathode et une anode reliée par une solution conductrice. L'ensemble est séparé du milieu par une membrane imperméable à l'eau et aux ions mais perméable au dioxygène dissout, l’ensemble sera appelé « Cellule ». L'électrode est polarisée. On enregistre le courant électrique généré grace à un enregistreur régle à