TP3 : PHOTORESPIRATION

Introduction : Lors de cette séance de travaux pratiques nous allons traiter de la photosynthèse et plus particulièrement des enzymes catalase et peroxydase qui interviennent dans ce processus. Nos études se feront à l’aide de deux types des plantes utilisant des mécanismes différents (les plantes en C3 et en C4). Durant la photosynthèse la plante produit de l’eau oxygénée (H2O2) qui peut être nocif pour elle, c’est pourquoi elle fixe le CO2. Nous comparerons donc les mécanismes de cette étape de carboxylation selon le type photosynthétique de la plante.

CATALASE :
a) Objectifs : Mesurer et comparer l’activité enzymatique de la catalase chez les deux types de plantes.

b) Méthodes : Nous réalisons un extrait enzymatique de l’orge et du maïs en prenant 500g de feuilles de chaque qui sont ensuite broyé avec 10mL de tampon phosphate. Le broyat et ensuite centrifugé, pour ensuite récupérer les extraits enzymatiques bruts qui seront conservés dans la glace.
Nous effectuons ensuite le dosage de la catalase avec :
2 témoins (25mL de H2SO4, 1mL de solution tampon et 10mL de H2O2)
2 extraits enzymatiques de l’orge (10mL H2O2, 1mL d’extrait et 25mL de H2SO4)
2 extraits enzymatiques de maïs (10mL H2O2, 1mL d’extrait et 25mL de H2SO4)
Les extraits restent incubés (5mins pour l’orge et 30mins pour le maïs) avant que l’on ajoute le H2SO4 qui stoppe la disparition de H2O2 à environ 50%.
On dose ensuite l’H2O2 à l’aide du permanganate.
c) Calculs et mesures :

Orge
Maïs
MF (matière fraiche) en g
0.5
0.5
VE (volume de l’extrait) en mL
18.5
20.2
PE (prise d’essai dosage) en mL
1
1 t (temps de la réaction) en s
300
300

On calcule ensuite l’activité catalasique de H2O2 oxydées avec :
Avec n = nb de moles de H2O2 oxydées par 1mL de KmnO4 = 5µmoles
Vt = volume moyen de permanganate pour les dosages temoins (mL)
Vx = volume moyen de permanganate pour les dosages des extraits (mL)
Les résultats sont présentés dans le