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Microorganismes | |[pic]
Dernière mise à jour : 6 mai 1999
Dénombrement des microorganismes revivifiables par incorporation en gélose
Objectifs
Evaluer la qualité bactériologique d'une eau. L'absence de micro-organismes dans une eau peut s'interpréter de deux manières : eau protégée des sources de contamination ou présence d'éléments toxiques ayant entraîné leur disparition. La présence d'une quantité importante de micro-organismes révèle l'existence d'une contamination dont il faut rechercher les causes et les éléments.
Informations
• Nature des micro-organismes : bactéries, levures, moisissures se développant en aérobiose à 37°C +/- 1°C. • Norme : pour les eaux livrées sous forme conditionnée, le nombre de micro-organismes doit être inférieur à 20/mL après 24 heures de culture, inférieur ou égal à 200/mL après 72 heures. • Effets sur la santé : ils dépendent des espèces de bactéries présentes dans l'eau et de leur nombre.
Principe de la mesure • Mise en culture sur une gélose nutritive d'un d'échantillon d'eau d'un volume de 1 mL et comptage des colonies après incubation à 37°C pendant 24 à 72 h.
Matériel
• Stérilisation : four (température minimale de 170°C) ; autoclave ; cocotte minute. • Etuve ou enceinte thermostatée 37°C +/- 1°C. • Matériel de microbiologie : boites de pétri stériles, pipettes 1 mL stériles (usage unique), flacons stériles, gélose PCA (Plate Count Agar), tubes à bouchon vissant contenant 9 mL d'eau stérile.
Protocole
• Préparation de la gélose et conservation : o Suivre les indications fournies avec la gélose PCA et stériliser en flacons de 100 mL à 200 mL. o Laisser cette gélose en surfusion dans une étuve à 47°C si le TP est prévu dans la semaine. Sinon conserver la gélose au réfrigérateur, la mettre en fusion au four ou au bain marie bouillant quelques heures avant le TP. • Stérilisation des flacons de prélèvement o Mettre du coton cardé (hydrophobe)