Résumé

Introduction: Le clonage, apparu dans notre société voilà 50 ans, est très présent dans l'actualité, souvent présenté par les médias sous un aspect négatif, et donnant lieu à de nombreuses polémiques. La notion de clonage recouvre un ensemble de techniques permettant d'obtenir la réplication à l'identique d'une cellule ou d'un organisme. La population obtenue est constituée de cellules ou d'organismes possédant tous le même patrimoine génétique, cet population forme un clone . Dès le début du XXe s., des cultures de tissus d'animaux et de végétaux ont été tentées. La culture de peau humaine est aujourd'hui pratiquement maîtrisée. Mais le sujet de ce TP aborde un clonage différent de celui présenté et critiquer dans les média. Il s'agit du clonage de molécules d'ADN du phage lambda dans un vecteur de clonage.

Les vecteurs de clonages sont des plasmides et possèdent tous des caractéristiques communes. Ils ont une origine de réplication qui leurs permet de se répliquer de manière autonome, un ou plusieurs gènes de résistance a un antibiotique pour la sélection des plasmide ayant intégrés le vecteur ou non, ainsi qu'une région possédant des sites de restrictions uniques pour différents enzymes de restrictions. La plasmide utilisé dans cette expérience est le pBlueScript, il possède des sites de coupure unique pour 7 enzymes de restrictions dont EcorI et HindIII, ainsi qu'un gène de résistance à l'ampiciline. Le gène de résistance permet à une culture en présence d'ampicilline de sélectionner toutes les bactéries ayant incorporés BlueScript, que ce BleuScript contienne ou non l'insert ( le fragment d'adn phage lambda).
Les enzymes de restrictions sont des endonucléases d'origine bactérienne et de véritables 'outils' utilisés en laboratoire pour pouvoir fragmenter l'adn. La coupure se fait en un site particulier reconnu par l'enzyme de restriction. Les séquences de nucléotides habituellement reconnues par les enzymes sont nommées « palindromes »