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LA LACTATE DESHYDROGENASE:
PURIHCATION PARTIELLE PAR CHROMATOGRAPHIE D'AFFINITÉ
La lactate deshydrogénase catalyse la réaction:
L lactate + NAD+ <

- > pyruvate + NADH +H+

La lactate deshydrogénase (LDH) est un tétramère constitué de quatre sous-unités de 35 kDa. Chez les mammifères deux types différents de sous-unité existent, le type* M
(pour muscle) et le type H (pour heart), ce qui correspond à cinq formes d' isoenzymes tétramériques: MH3, H4

M4, M3H,

Bien que ces formes hybrides existent dans la plupart des tissus la sous-unité de type H prédomine dans le muscle cardiaque, tandis que la sous-unité de type M prédomine dans 'les tissus comme le muscle squelettique ou le foie.
Dans le cas d'infarctus du myocarde, létaux d'isoenzyme H4 dans le sérum augmente de façon dramatique dans les 12-24 heures, ce qui permet une confirmation du diagnostic.
La forme H4 a un KM faible pour le pyruvate, et l'enzyme est inhibée de façon allostérjque par de fortes concentrations de ce métabolite. L' isoenzyme M4 a un KM plus élevé pour le pyruvate, et celui-ci ne l'inhibe pas.
Les autres isoenzymes ont des propriétés intermédiaires qui varient en fonction du rapport des deux types de sous-unités.
Ces isoenzymes diffèrent non seulement par leurs constantes cinétiques mais également par leurs pH isoélectriques, le monomère H étant le plus chargé négativement à pH neutre^ou alcalin. Cette dernière propriété est utilisée pour séparer les isoenzymes de la
LDH par électrophorèse non dénaturante en gel de polyacrylamide.
Au cours de cette manipulation, la purification partiellede la LDH sera effectuée par chromatographie d'affinité sur bleu Cibacron fixé par covalence sur une phase stationnaire poreuse. La structure du ligand est la suivante:

0

NH

liaison covalente avec le support

\ relativement peu spécifique, et permet la purification d'un groupe de protéines et non pas d'une protéine unique; la purification de la LDH ne sera donc