La Phosphatase alcaline

Le but du TP Nous voulons étudier la Phosphatase alcaline. Nous voulons observer ce que devient son activité lorsque l’on fait varier différents facteurs, comme laconcentration en substrat initiale dans une première partie, et le pH dans une seconde. Pour s'intéresser à son activité, on se servira du calcul de son activité spécifique dans une situation donnée, et decertaines représentations de la vitesse de réaction en fonction de la concentration en substrat, ou en fonction du pH. Principe La Phosphatase alcaline est une enzyme, c’est donc une molécule qui abaissel’énergie d’activation d’une réaction, ici celle de la réaction d’hydrolyse de la liaison monoester du PNPP. Ce substrat est incolore, et son hydrolyse produit du PNP jaune absorbant à 410 nm. Quandon mettra le substrat en présence de l’enzyme, il sera alors possible de mesurer l’absorbance à 410nm de la solution en fonction du temps, reflétant l’apparition de PNP, et ainsi en déduire desvitesses de réaction. C’est ce que nous ferons pour chaque facteur étudié: pour la concentration en PNPP initiale, et le pH. La gamme étalon Le zéro fait avec de l’eau distillée, on mesure ensuitel’absorbance de chacun des six tubes contenant des volumes croissants de PNP à 0,5 mM (six tubes: 0; 0,025; 0,05; 0,1; 0,15 et 0,2 mL). Le changement d’absorbance est directement proportionnel à a quantité de PNPdans la cuve. On y ajoute aussi du tampon Tris-HCL pH 8,3 servant à maintenir l’enzyme à un pH optimal pour son fonctionnement, du ZnCl2 0,6 mM, l’ion Zn2+ étant un co-facteur important aussi pour lebon fonctionnement de l’enzyme, et de l’eau. Préparation des solutions de substrat On a effectué une dilution en cascade de PNPP à partir d’une solution mère de 5mM afin de préparer 7 solutions desubstrat de 10mL chacune à respectivement 5mM, 2,5mM, 1mM, 0,5mM, 0,25mM, 0,167mM, et 0,125mM.
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dilution 7,1cm

On utilise la formule C1·V1 = C2·V2 pour calculer les volumes de [à continuer]

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(2011, 12). Tp phosphatase alcaline. Etudier.com. Récupérée 12, 2011, à partir de http://www.etudier.com/dissertations/Tp-Phosphatase-Alcaline/315161.html

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