Tp d'immunologie LOCALISATION D'UNE REGION CHROMOSOMIQUE PAR PCR ET TEST ELISA CHEZ LE RAT

2288 mots 10 pages
I. Introduction Le sujet de base du projet est l'étude d'une maladie auto-immune (c'est-à-dire que le système immunitaire cible les molécules du soi) et multigénique, impliquant plusieurs gènes à la fois et par conséquent plusieurs allèles. C'est une maladie multifactorielle faisant intervenir des facteurs génétiques et environnementaux. Le but du projet est de localiser le gêne d'intérêt contrôlant le phénotype de la maladie. Du fait de la nature multigénique de la maladie, il s'agit de localiser le ou les gènes d'intérêt contrôlant l'un des caractères phénotypiques de la maladie: la concentration en immunoglobulines IgG1. En effet, les patients atteints présentent un taux élevé de IgG1 sanguins. Pour ce faire, nous allons tenter de localiser la région chromosomique contenant les gènes en question appelée QTL (Quantitative Trait Locus) en utilisant la stratégie du clonage positionnel. Cette stratégie est souvent utilisée lorsque les gènes en question sont inconnus ou si l'on n'a pas la connaissance biologique du caractère, et consiste à approcher le gène en se basant sur sa localisation chromosomique. Une première localisation du QTL a été effectuée, non-détaillée dans ce TP. Pour ce faire, deux souches parentales de rats aux phénotypes opposés ont été utilisées: les rats Brown Norway (BN) "sensibles" possédant un taux élevé d'IgG1 sanguins, et les rats Lewis (LEW) "résistants" présentant un faible taux d'IgG1 sanguins. Le croisement de ces deux lignées donne la génération F1, puis un nouveau croisement entre les rats F1 (LEWxBN)x(LEWxBN) donne la génération F2 qui fera l'objet d'études. En utilisant 205 rats F2, une analyse de liaison génétique a été effectuée en utilisant des marqueurs génétiques type microsatellites (240 marqueurs au total), permettant d'établir une carte génétique précise de l'ensemble des chromosomes (en cM). Une région appelée Aiid2 localisée sur le chromosome 10, faisant 27,80 cM, a été identifiée, et il convient d'affiner la localisation

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