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2519 mots
11 pages
Filière SVI – S6Module de Génétique et Biologie
Moléculaire
Elément 2: Biologie Moléculaire
TD N°1:TECHNIQUES DE
SEPARATION ET D’ANALYSE DES
ACIDES NUCLÉIQUES:
ADN, ARN & PLASMIDES
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TD1.TECHNIQUES DE SEPARATION
ET D’ANALYSE DES ACIDES
NUCLÉIQUES
1.Purification des acides nucléiques
1.1.Extraction des ADN
1.2.Extraction des ARN
1.3.Extraction
des
1.3.1. Rappel sur les plasmides plasmides 1.3.2. Purification par Lyse alcaline
1.3.3. Purification par Gradient de chlorure de césium 2.Séparation des acides nucléiques
2.1.Electrophorèse sur gel d’agarose
2.2.Electrophorèse
sur
gel
de
polyarylamide
3.Elaboration
de Cartes de restrictions des
1.Purification des acides
1.1.Extraction
nucléiques
de
=technique l’ADN permettant d'isoler l'ADN de cellules ou de tissus.
L'ADN extrait digestion, hybridation (Southern blot), séquençage, PCR, clonage…
Différents protocoles pour extraire l'ADN avec même schéma de principe :
•Lyse des cellules
•Elimination des protéines
•Elimination des autres acides nucléiques
(ARN...)
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TD1.TECHNIQUES DE SEPARATION
ET D’ANALYSE DES ACIDES
NUCLÉIQUES
•Concentration de l'ADN par précipitation à
Différentes variantes employées: l'ADN génomique (issu du ou des chromosomes des cellules analysées)
Ou
l'ADN plasmidique (provenant de plasmides portés le plus souvent par des cellules bactériennes comme
Escherichia coli).
Kits commerciaux extractions rapides à l'aide de réactifs prêts à l'emploi.
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TD1.TECHNIQUES DE SEPARATION
ET D’ANALYSE DES ACIDES
NUCLÉIQUES
Préparation d'ADN génomique
•disperser les bicouches lipidiques des membranes
•dénaturer les protéines srtt celles associées à l'ADN dans la chromatine l'ADN : très longs filaments s'opposant aux écoulements hydrodynamiques. protéines dénaturées précipité
=broyage ou pas + extraction/détergents à l'interface phénol-eau
=
« gâteau » l'ADN en solution dans la phase aqueuse =extraction / solvants organiques, en général du phénol +/-chloroforme
L’ADN