6.2. Courbe standard :
Pour quantifier l’ONP, il faut d’abord déterminer son spectre d’absorption. Ceci est dans le but, non seulement de déterminer sa longueur d’onde optimale mais aussi pour établir une courbe standard qui servira de référence afin de déterminer la concentration d’inconnus par la suite.
Protocole : 1- Mettre 500 µl du tampon acétate de sodium à 100 mM pH 4,5. 2- À partir de la solution mère d’ONP 10mM, préparez des solutions contenant différentes quantités d’ONP. 3- Compléter à 1ml avec H2O. 4- Ajouter 2ml de solution stop (Na2CO3) 5- Mesurer la densité optique à 420nm N.B : La courbe standard est obtenue en ayant la densité optique sur l’axe des ordonnées et la quantité d'ONP en µmol sur l’axe des abscisses, elle permettra de fournir la concentration du produit formé en µ moles d’ONP. Tableaux X : densité optique des différentes quantités de l'O-nitrophenol (ONP) # tube | ONP 10 mM (µL) | H2O (µL) | Tp acétate 50 mM pH 4,5 (µL) | Na2CO3 0,2M (mL) | Volume final (ml) | Quantité d'ONP (µmol) | ONP (µM) | Absorbance prévue (420 nm) | Absorbance obtenue | | | | | | | | -Na2CO3 | + Na2CO3 | | | 1, 2 | 0 | 500 | 500 | 2 | 3 | | | | 0,0 | 0 | 3, 4 | 10 | 490 | 500 | 2 | 3 | | | | 0,135 | | 5, 6 | 20 | 480 | 500 | 2 | 3 | | | | 0,4 | | 7, 8 | 40 | 460 | 500 | 2 | 3 | | | | 0,6 | | 9, 10 | 60 | 440 | 500 | 2 | 3 | | | | 0,8 | | 11, 12 | 80 | 420 | 500 | 2 | 3 | | | | 1,0 | | 13, 14 | 100 | 400 | 500 | 2 | 3 | | | | 1,2 | |

7.1 Extraction :
Les β-galactosidases contenues dans les cellules tissulaires de la patate sucrée seront extraites à partir de 300 g de matériel végétal. Le respect de certaines conditions d’extraction est essentiel pour le bon déroulement de celle-ci. En effet, il est important de choisir un tampon approprié, celui-ci est choisi en fonction de son maintien d’un pH fixe. De ce fait, le matériel végétal sera pesé,