Clonage

4893 mots 20 pages
MONTGAILLARD Gilles

FREJEBISE Cédric

JANVIER 2000 IUP BIOINGENIERIE OPTION 1 2ème ANNEE

Introduction

A. Construction du vecteur pUT 807

I. Présentation des plasmides

1. Plasmide pUT 599 2. Plasmide pUT 654 3. Plasmide pUT 807 4. Intérêt du plasmide pUT 807 II. Principe des méthodes utilisées. 1. La PCR 2. Intérêt de la PCR et conditions opératoires 3. Réactions enzymatiques : restriction et ligation 4. Electrophorèse en gel d’agarose a) Migration/Séparation b) Conditions opératoires c) Visualisation d) Purification

III. Résultats et discussion

1. Gel 1 2. Gel 2
B. Transformation bactérienne

I. principes 1. la chimiocompétence 2. l’électroperméabilisation II. Résultats et discussion

C. Technique d’analyse des protéines recombinantes I. principes

1. Extraction des protéines cellulaires 2. Electrophorèse en SDS-PAGE 3. Transfert sur membrane de nitrocellulose 4. Révélation et immunodétection II. Résultats et discussion

D. Analyse de l’ADN recombinant I. Principes 1. Extraction d’ADN plasmidique 1. Digestion des plasmides 2. Séquençage par la méthode de Sanger

II. Résultats et discussion

1. Gel 1: ADN plasmidiques non digérés 2. Gel 2: ADN plasmidiques digérés par les enzymes 3. Séquençage
Conclusion

INTRODUCTION

La transformation bactérienne utilisant de l’ADN plasmidique modifié par le soin des expérimentateurs est devenue monnaie courante dans les laboratoires de biologie moléculaire et de génétique. Ceci

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