Master ACQ-TQE M1S1
TP MICROBIOLOGIE No3- Analyse de l’eau
But:
Lors le TP, on vas apprendre l’analyse de l’eau de la Somme et l'eau destinée à la consommation humaine: la flore totale, coliformes et les streptocoques par deux techniques différents: le NPP et la filtration sur membrane.
I-EAU CONTAMINEE (EAU DE LA SOMME)
Principe:
La technique du NPP fait appel à la méthode de fermentation en tubes multiples, au cours de laquelle au moins trois dilutions décimales de l'échantillon sont ensemencées dans des éprouvettes de bouillon et incubées à une température précise, pendant une période donnée.
La méthode du NPP, dérivée des études de Mac Grady, consiste à interpréter les résultats en comparant les trois essais et leur résultats. Il s’agit d’une interprétation probabiliste
Matériels et Protocole:
Avant d’ensemencer les milieux, on effectue des dilutions en cascades de la solution 10-1 à la solution 10-4 :
On prélève 50mLde l’eau de la Somme à l’aide d’une bouteille en verre attaché au bout d’une ficelle.
On prélève 10mL de l’eau à analyser que l’on place dans un tube à essai à l’aide d’une pipette stérile
On prélève du tube contenant la l’eau contaminée 1mL que l’on place dans un des tubes contenant les 9mL de l’eau physiologique stérile, on homogénéise, puis on prélève 1mL de ce tube pour le mettre dans un troisième tube et ainsi de suite jusqu’au cinquième tube. (voir schéma ci-dessous)
Afin de dénombrer les microorganismes contenus dans l’eau on suit le tableau suivant :
Micro-organismes
Milieux
Dilutions
Incubation
Flore bactéries totale
LB(Luria-Bertani )
1mL(10-1 à 10-5)
24h/37oC
Coliformes
BLBVB
1mL(10-1 à 10-5)
24h/37oC
Streptocoques
Rothe
1mL(10-1 à 10-5)
24h/37oC
Analyse des résultats:
1 - La flore bactérienne totale
Dilutions
10 0
10 -1
10 -2
10 -3
10 -4
Résultats
+ + +
+ + +
+ + -
+ - -
- - -
2 - Les coliformes
Dilutions
10 0
10 -1
10 -2
10 -3
10 -4
Résultats
+ + +
+ + -
+ - -