Compte rendu du TP : électrophorèse de protéines, électrotransfert et immunorévélation

But :
L’objectif principal de ce TP est l’analyse par électrophorèse des protéines récupérées dans différentes fractions lors du TP consistant à extraire une molécule d’intérêt, le lysozyme, du reste des protéines d’un blanc d’œuf.
Principes :
- Electrophorèse : il s’agit d’une méthode qui permet de séparer et de caractériser des molécules. Elle se base sur le déplacement de molécules chargées sous l’effet d’un champ électrique. Du fait de leurs caractéristiques propres et en fonction des conditions de l'électrophorèse ces molécules auront des vitesses de migration différentes, elles vont donc se séparer les unes des autres. A charges identiques, les molécules se sépareront selon leur taille. Nous utiliserons une électrophorèse dite sur gel, ce gel agit en réalité comme un tamis moléculaire à travers duquel les petites molécules circuleront plus facilement que les grosses et donc migreront plus loin à travers le gel. Nous avons utilisé un gel de polyacrylamide a différentes concentrations, ces différentes concentrations forment des maillages plus ou moins serrés donc facilitant plus ou moins la migration des différentes molécules. Notre électrophorèse a également été réalisée en conditions dénaturantes en présence de SDS (détergent) qui charge négativement l’ensemble des molécules des fractions. Ainsi, notre électrophorèse sépare bien nos molécules en fonctions de leurs poids moléculaires, les plus petites migrant plus loin.
- Gel de séparation et gel de concentration : le gel de séparation constitué d’acrylamide, de bisacrylamide (agent pontant), de TEMED et d’ammonium persulfate (agents permettant la polymérisation) est le premier gel coulé et est le gel de l’électrophorèse a proprement parlé puisqu’il est le siège de la séparation des molécules. Le gel de concentration est lui coulé au dessus du gel de séparation et a pour but de permettre une entrée homogène de