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culture cellulaire

377 mots 2 pages
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Les conditions de culture
Le matériel
Les milieux de cultures

Différents types de culture
Culture primaire
Lignées ou cellules tumorales

Application sur hepatocytes de souris



Flacons






En polystyrène optiquement clair stérile Traités ou non pour adhérence
De contenance et surface différentes

Plaques multipuits




En polystyrène optiquement clair stérile Traités ou non pour adhérence
À fond plat et couvercle



Boites



En polystyrène optiquement clair stérile Traités ou non pour adhérence



Exigences cellulaires minimales









eau ions minéraux source de carbone et d'énergie source d'azote source d’acides gras pH constant 7,4


Base commune (milieux Hanks, Earl,
PBS, Gey) :





Sels minéraux
Sucre : glucose

Compléments variables selon milieux (RPMI, MEM, DMEM…)




Acides aminés
Vitamines et cofacteurs
Bases azotées, ribose et désoxyribose

les



Compléments à ajouter extemporanément :


Mélanges d’antibiotiques au taux final de 1 %



Glutamine à 1%



Sérum de veau fœtal entre 1,5 et 10 %
 apportant

 facteurs de croissance cellulaire
 EGF (facteur de croissance épidermique),
 FGF (facteur de croissance fibroblastique)
 PDGF (facteur de croissance dérivé des plaquettes)

 Facteurs de différenciation comme fibronectine (ancrage des cellules).
 Inhibiteurs comme l’alpha1 antitrypsine (neutralisation de l’action enzymatique de la trypsine)



Cellules normales




À nombre de repiquages limité

Obtention



À partir d’un prélèvement tissulaire
Dissociation des liaisons fortes entre cellules
 Mécanique : broyage, vortexage …

 Enzymatique essentiellement


Mise en culture : culture primaire



Repiquage ou « passage » : culture secondaire

Division : environ 25 à 30 heures
Si cellules adhérentes

Formation d’un tapis (« à confluence ») pour une densité 105 /

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