Electrophorese sur gel d'acrylamide

4118 mots 17 pages
RESUME

L'électrophorèse sur gel d'acrylamide est une méthode courante permettant de séparer des protéines en fonction de leur charge ou de leur poids moléculaire si leur charge sont identiques. Notre étude se portera sur trois échantillons différents : BSA à 1,5 mg/mL, LDH et une protéine inconnue X à 2mg/mL qui devra être identifiée. L électrophorèse se fera selon deux conditions : en condition dénaturante à une concentration d’acrylamide où les protéines ne migrent que suivant leur poids moléculaire puisqu'elles ont toutes la même charge. En effet, dans ces conditions, le gel possède un détergent ionique (SDS) qui confère une charge globale négative donc tous les échantillons seront négatifs. Le SDS va aussi permettre de dénaturer les protéines qui acquerront toutes la même conformation tridimensionelle, c’est-à-dire linéaire. en condition non dénaturante à 4 concentrations d’acrylamide différente : 5,5 % ; 6,9 %, 8,2 % et 9 %. Ici les protéines migrent en fonction de leur charge mais aussi de leur taille.
Grâce à ces deux manipulations, nous obtiendrons des résultats que nous devrons par la suite exploiter grâce à des courbes pour trouver les différents poids moléculaires.
Dans notre cas, nos résultats nous ont permis de déterminer le poids moléculaire en condition dénaturante du monomère de la BSA de 58 kDa, de la LDH de 38 kDa et de la protéine inconnue de 26 kDa.
Après analyse des résultats et de la fiabilité des deux méthodes, nous avons pu déduire que notre protéine X est une anhydrase carbonique d’érythrocytes de bovins. Et nous pouvons connaître le poids moléculaire des différentes formes de la BSA grâce à celui du monomère. On obtient donc les poids moléculaires suivants : dimère de la BSA de 116 kDa, trimère de la BSA de 174 kDa et du tétramère de la BSA de 232 kDa.
En ce qui concerne les résultats en condition non dénaturante nous avons obtenus le poids moléculaire de la LDH en condition native de 95 kDa. Cependant, nous savons que ce

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