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Pages: 13 (3105 mots) Publié le: 16 mars 2013
M1 Biologie Santé
Université François Rabelais – Tours

BENOIT Sallya
CAREL Stessy

2013

06/03/2013

Travaux Pratiques de Biochimie des Substances Naturelles

I. Les terpènes :
Les terpènes sont des métabolistes secondaires formés à partir d'IPP (isopentényl pyrophosphate), présentent chez les végétaux. Ils ont deux propriétés fondamentales :

* une propriété odoriférante* ils interagissent avec la lumière du fait de l'alternance de simples et doubles liaisons.
Ces molécules, sont des hydrocarbures insolubles dans l’eau mais soluble dans les solvants organiques. On se servira de cette propriété pour procédés à l’extraction et l’identification par chromatographie sur couche mince des terpènes présents dans la menthe poivrée et les clous de girofle. Nousallons utiliser deux types d’extraction l’extraction par macération pour la menthe poivrée et l’hydrodistillation pour les clous de girofle, cette hydrodistillation sera suivi d’une étape de purification acide-base.
Identification des différents terpènes contenus dans l’huile essentielle de menthe poivrée :
*
1- Matériel et méthode 
* Matériel  et réactifs :
* 0.2 g defeuille séchée de menthe poivrée | * Mortier et un pilon |
* 2 mL de dichlorométhane (CH2Cl2) | * Ampoule à décanter |
* 0.1 mL de toluène (C7H8) | * Béchers |
| * Eprouvettes |
* Mode opératoire :
Afin déterminer les différentes constituant huiles essentielles présentes dans la menthe poivrée, nous avons procédé par une extraction par solvant. Nous avons tout d’abordà un réaliser un broyage afin faciliter la dispersion des différents constituants. Puis nous avons rajouté 2 mL de CH2Cl2 et laisser macérer quelques minutes afin de permettre la diffusion des molécules organique dans le solvant, puis filtrer. Le filtrat obtenu contient toute les molécules organique contenu dans les feuilles de menthe poivrée et le principal souci c’est que les molécules faisantpartie de l’essence de menthe son en quantité moindre à rapport à la chlorophylle.
Il aurait été plus intéressant de réaliser une hydrodistillation (pour ne pas être parasité par la chlorophylle), suivi d’une extraction du distillat par décantation dans de l’éther éthylique (il faudra penser à saturer la phase aqueuse en sel afin de permettre le relargage des molécules constituants l’huileessentielle de menthe).
2- Analyse des résultats :
Notre chromatographie n’ayant pas fonctionné, il semblerait que cela est dû à la température à laquelle nous avons mise à sécher notre plaque, nous utilisons donc les résultats fournis à l’ensemble de la classe.
Nous avons réalisé une chromatographie sur couche mince (CCM) qui est une technique d’analyse permettant de déterminer lacomposition d’un mélange. Pour cela nous plaçons sur une plaque de silice (phase stationnaire) 4 échantillons :
* Echantillon A : 10 µL de carvone
* Echantillon B : 10 µL de menthone
* Echantillon C : 20 µL d’essence de menthe
* Echantillon D : 30 µL de solution témoin (composé de menthol, cinéole, thymol, d’acétate de menthyle et du toluène

Les échantillons A, B et D sont deséléments connus et donc serviront d’échantillon-témoin pour l’analyse de l’essence de menthe. Nous mettons la plaque dans une cuve à chromatographie qui contient un mélange d’acétate d’éthyle et du toluène (phase mobile).

Lorsque la phase mobile a parcouru une distance de 15 cm, nous arrêtons la chromatographie, nous retirons la plaque de la cuve puis la laissons sécher quelques minutes à l’airlibre. Ensuite, nous réalisons la révélation de la migration en vaporisant de la vanilline sulfurique puis nous la plaçons durant 10 minutes à 140°C.
Photo [ 1 ]: Plaque de chromatographie après révélation à la vanilline sulfurique
Nous observons : (Annexe - Tableau n° 1 et 2)
La distance entre le front du solvant et la ligne de dépôt est de 7.7 cm. On peut donc calculer le rapport frontal qui...
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