Florence Nightingale est née le 12 mai 1820 dans la Villa Colombia à Florence (Italie). Deuxième de la famille, elle est baptisée du nom de sa ville de naissance (tradition inhabituelle à l'époque). Ses parents, William Edward et Frances Nightingale étaient un couple riche, qui voyagèrent en Europe pendant deux ans pendant leur voyage de noce. Pendant leur voyage, leur première fille Parthenope, était née à Naples (Parthenope étant le nom grec de l'ancienne ville), suivi un an plus tard de la naissance de Florence. A leur retour en Angleterre, en 1838, la famille Nightingale partage son temps dans deux maisons, en été ils vivent à Lea Hurst à Derbyshire, et en hiver à Embley dans le Hampshire. Lea Hurst est maintenant une maison de retraite et Embley est une école.
Parthenope et Florence reçurent, à la maison, l'enseignement de leur père, lui-même diplômé de l'université de Cambridge. Florence était une enfant studieuse, elle suit des cours de mathématiques, alors que sa sœur excelait à la peinture et à la couture. Florence a grandi pour une jeune femme vive et attirante, admirée dans le cercle social de la famille et on pouvait prévoir qu'elle ferait un bon mariage, mais Florence a eu d'autres soucis. En 1837, tandis que dans les jardins d' Embley, Florence avait ce qu'elle a décrit comme un "appel". Florence entendit la voix de Dieu l'appeler pour effectuer son travail, mais à ce moment elle n'avait aucune idée ce que serait ce travail. La misère des années 40 lui fait entrevoir sa vocation.