FRACTIONNEMENT CELLULAIRE, ISOLEMENT ET CARACTERISATON DES MITOCHONDRIES :

II -] Matériel et Méthode :

Dans ce TP, on manipule à froid pour figer, stopper l’activité des cellules et donc des organites en utilisant aussi de la glace pilée.
Ici, on isole des mitochondries à partir de pommes de terre épluchées. En effet, ce féculent est épluché pour éviter qu’elles deviennent vertes à la lumière. Cette coloration témoigne de la présence de chloroplastes, éléments essentiel au phénomène de photosynthèse. On estime que ce mécanisme est inverse à celui de la respiration cellulaire, les résultats finaux seraient incohérents par rapport au but de ce TP. En ce qui concerne les chloroplastes se trouvant à l’intérieur des pommes de terre et non à sa surface, ces chloroplastes ont été transformées en amyoplastes.
Le broyage des tubercules de pomme de terre épluchées, lavées et coupées en petits cubes permet d’obtenir un filtrat à l’aide d’un mixeur après avoir essoré le solide.
Le tampon de broyage est une solution qui garde le broyage à un pH physiologique de 7,4 pour que les chaines mitochondriales soient gardées intactes pour pas qu’elles ne soient dénaturées par du pH.
Le pH est vérifié, on attend à ce qu’il soit neutre c'est-à-dire qu’il soit de 7,5.
Ce broyage permet de récupérer la solution contenant toutes les protéines et les organites des cellules contenues dans le parenchyme.
L’analyse est effectuée à partir de celui-ci.
L’EDTA est un chélateur d’ions bivalents. Cet enzyme dégrade des protéines, on veut alors inhiber les protéines.
Le BSA (Albumine Sérum Bovine) est une grosse protéine, on l’a couplée à la cystéine. On ajoute beaucoup de protéines dans le milieu dans le but de détourner l’activité des protéases.
Le tampon de broyage contient de l’EDTA, du BSA, de la cystéine, du Tri – HCL et du saccharose. Le saccharose sert à concentrer le soluté pour faire exploser la cellule, le but est qu’une masse d’eau pénètre dans la cellule. L’eau à