glycogéne dans le foie

Pages: 3 (582 mots) Publié le: 11 janvier 2014
Extraction et mise en évidence
de la quantité de glycogène présent dans le foie
TP mis au point et présenté par Nadine MORANGE et Dominique GANTHEIL : Lycée L. Limosin
BUT :
On se propose dedéterminer par la méthode colorimétrique de Beer-Lambert, la quantité de glycogène préalablement extraite d' un échantillon de foie le plus frais possible, plus l'abattage de l'animal sera récent, plus lerésultat de la manipulation sera probant .
 
MATÉRIEL NÉCESSAIRE :
Matière première
Appareillage
Verrerie
Réactifs
Matériel ExaoFoie de veau ou de porc fraisBalance
Broyeur électriqueTrompe à vide
PassoireBuchner + filtres
Fiole à vide
Bêcher
Éprouvette
PipetteEau iodée
Alcool à 95
HCl concentrée
GlycogèneColor 4 (Jeulin)
Cuves colorimétriques
Logiciel Enzymo MANIPULATION :
La manipulation se déroule en deux temps, il faut en premier lieu extraire le glycogène du foie puis dans un deuxième temps réaliser le dosage de l'échantillon obtenu par rapport à une gammeétalon en utilisant la méthode de Beer-Lambert .
Extraction du glycogène :
Peser et couper en petits morceaux 10 g de foie frais
Faire bouillir le foie dans 100 ml d'eau distillée pendant 2 minutesÉgoutter à l'aide d'une passoire puis le broyer avec un mixeur
Ajouter 50 ml d'eau distillée et faire bouillir 5 minutes
Filtrer sous vide sur Buchner
Précipiter le filtrat récupéré avec 5 gouttesd'HCl concentré, (si un précipité important se forme, filtrer à nouveau afin d'éliminer l'excès protéique).
Traiter le filtrat récupéré par 4 fois son volume d'alcool à 95 puis filtrer sous videRécupérer le filtre, le laisser égoutter puis reprendre celui-ci avec 5 ml d'eau distillée
Tester la présence de glycogène en prenant 3 gouttes du liquide obtenu et rajouter une goutte d'eau iodée*, (on doitobtenir une couleur brun-acajou).
*Eau iodée : dissoudre 1 g d'iode dans 2 g d'iodure de potassium puis compléter à 100 ml avec de l'eau distillée
Dosage de l'échantillon suivant la méthode...
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