TP génétique : extraction de l'ADN

Introduction Ce TP de biologie moléculaire à pour but d’extraire et de quantifier de l’ADN. L’ADN, aussi connu sous le nom d’Acide Désoxyribo Nucléïque, est une longue molécule qui contient l’information génétique de tout être vivant, qu’il soit végétal, animal ou simplement un microorganisme. Dans les formes de vie plus évoluées ou plus complexes, l’ADN est contenu dans le noyau des cellules (excepté les hématies). Les cellules de l’organisme n’utilisent qu’une partie de la molécule d’ADN appelée gène, pour produire les protéines dont elles ont besoin pour fonctionner. L'extraction de l'ADN est une technique permettant d'isoler l'ADN de cellules ou de tissus, ici, de tissu prélevé sur une feuille de laitue ou de pétunia. L'ADN ainsi extrait peut ensuite être dosé et utilisé pour des recherches de biologie moléculaire.
L’extraction de l’ADN suit toujours un même schéma :
1. Lyse des cellules
2. Elimination des protéines
3. Elimination des autres acides nucléiques (ARN...)
4. Concentration de l'ADN par précipitation à l'alcool Dans le cadre de ce TP, on utilise un tampon d’extraction de force ionique élevée qui à pour rôle de déstabiliser l’enveloppe nucléaire, et donc de disperser la chromatine qu’elle renfermait. L’ADN extrait est contrôlé, par mesure de l'extinction dans l'UV au moyen d'un spectrophotomètre. L’ADN extrait subit aussi divers traitement au cours de ce TP, en effet, on fait intervenir une enzyme de restriction. L’enzyme de restriction (Ecor1) est une protéine qui peut couper un fragment d'ADN au niveau d'une séquence de nucléotides caractéristique appelée site de restriction. Chaque enzyme de restriction reconnait ainsi un site spécifique.
Egalement on fait agir une Dnase et une Rnase toujours sur cet ADN extrait. Et ces ADN extraits traités différemment sont analysés par électrophorèse sur gel d'agarose, on analyse la présence et la taille des acides