1 ADN RECOMBINANT
I. TECHNIQUES D’ÉTUDE DE L’ADN
1. Purification de l’ADN
1. Caractéristique de l’ADN
L’Adn est en double hélice, il possède 10 nt/ tour d’hélice , 3,4nm/tour
Le génome d’E. Coli possède un seul chr soit environ 4.10⁶ paires de bases ( pb )
La taille disproportionnée de la molécule d’Adn entraîne une grande sensibilité aux cassures mécanique lors de l’extraction.
Étapes : Lyse des cellules Traitements chimiques, enzymatiques et physiques   
Centrifugation
1. Pour la lyse …afficher plus de contenu…

1. Spectrophotométrie / mesure absorbance ou densité optique DO
On utilise la loi de BEER- LAMBERT : ε est défini pour chaque composé, il dépend de la nature de la solution Si l = 1 cm alors A = ε x C l’absorbance est proportionnelle à la concentration
Longueur d’onde = 260 nm (ultra-violet) : longueur d’onde d’absorption max de l’ADN Absorption via les cycles aromatiques qui composent leurs bases La valeur de 260 nm est une valeur moyenne d’absorbance des 4 bases …afficher plus de contenu…

Ex : Une solution d’ADN de concentration C, à déterminer : 10 µl de solution d’ADN dilués dans 990 µl d’eau (dilution au 100ème) 
Mesure de DOdilution = 0,1 Concentration en ADN dans la solution diluée : 50 x 0,1 = 5 ng/µl Concentration en ADN dans la solution de départ : C = 5 x 100 = 500 ng/µl 
Si la solution d’ADN n’est pas pure, la DO va en général être surestimée
Ex : si présence de protéines dans la solution, la DO260 mesurée sera la somme de l’absorption due à l’ADN présent plus une absorption due aux protéines contaminantes R (Ratio) = approximation de la pureté d’une solution d’ADN : R=DO260/DO280 
ADN pur → R entre 1,8 et 2.
2. Mesure de fluorescence
Le principe est d’utilisé une molécule fluoresecnte incorporée dans