Le milieu Hajna Kligler

Principe

Il s'agit d'un milieu utilisé pour l'identification des bactéries de la famille des Entérobactéries. Ce milieu permet de mettre en évidence :
• la dégradation du glucose
• la dégradation du lactose
• le production de gaz dû à la formation du glucose
• la production de H2S (sulfure d'hydrogène)
• permet la réalisation du test ONPG

Composition du milieu

Composition | Concentration (g/L) | - Extrait de viande de boeuf - Extrait de levure - Peptone - NaCl - Citrate ferrique (révèle la production de H2S par une coloration noire) - Thiosulfate de sodium (apport de Soufre pour H2S) - Lactose (glucide plus complexe que le glucose) - Glucose - Rouge de phénol (indicateur de pH) - Agar - pH = 7,4 (milieu brun rougeâtre) | 3 3 20 5 0,3 0,3 10 1 0,05 12 qsp 1L d'eau |

Le milieu est coulé en tubes de 10 mL.
Il est présenté en position inclinée avec un culot de 3 cm environ.

Technique d'ensemencement

Ensemencer d'abord la pente par stries serrées, puis le culot par piqûre centrale. La pente doit être largement ensemencée, contrairement au culot.
Ne pas visser complètement le bouchon du tube, de façon à permettre l'aération du milieu (aérobiose).
Incuber 24h à 30 ou 37°C.

Principe : La bactérie, si elle le peut, attaque le glucose. Celui-ci étant de consommation faible (1 g/L) produira une acidification uniquement en zone d'anaérobie donc, dans le culot. Une fois le glucose dégradé, la bactérie attaquera le lactose si elle le peut. Comme le lactose est 10x plus concentré que le glucose, l'acidification sera assez importante pour envahir tout le tube. Si la bactérie ne paut pas dégrader le lactose, après le glucose, elle s'attaquera aux peptones qui conduira à une alcalinisation du milieu (coloration rouge vif sur la pente).

Remarque : une bactérie glucose – sera forcément lactose –

Lecture

La lecture du milieu Hajna Kligler se fait en trois temps :