L’insuline est une hormone sécrétée par le pancréas , plus précisément par des cellules spécialisées situées dans les îlots de Langerhans . Elle agit comme une clé qui ouvre une porte permettant ainsi l'entrée du glucose (sucre) dans les cellules de l’organisme. Celles-ci utiliseront le glucose comme carburant ou le mettront en réserve pour une utilisation future. Les microtubules quant à eux sont présents dans l’ensemble des cellules eucaryotes. Ils peuvent être fortement représentés dans certains types cellulaires comme les neurones où ils ont un rôle fondamental dans le transport axonal des vésicules, ou dans des cellules à forte activité sécrétoire. Quel rôle jouent les microtubules dans la sécrétion d'insuline par les cellules murines pancréatique-β ?
MATERIEL ET METHODES
Nous avons effectués dans un premier temps un marquage par immunocytofluorescence des microtubules à partir de cellules traitées ou non à la colchicine. Puis dans un deuxième temps un dosage par ELISA de l'insuline sécrétée par les cellules pancréatiques en réponse au glucose et à l' effet de la colchicine.
Principe du marquage par immunocytofluorescence : La préparation qui comporte la molécule à mettre en évidence est plongée dans une solution contenant l'anticorps dit primaire. Celui ci se fixe de façon spécifique à l'antigène. Après rinçage, l'excès d'anticorps est évacué, il ne reste que celui qui s'est fixé. Cet anticorps pourrait être directement porteur du marqueur (fluorophore ou enzyme), toutefois, les biologistes ont choisi une deuxième solution : les anticorps produits par un animal sont eux même des antigènes pour un autre animal. Cet anticorps primaire va être à sont tour reconnu par un anticorps secondaire dirigé contre les anticorps de l'animal qui a servi à produire l'anticorps primaire et qui va réellement porter le marqueur.
-Ils y a plusieurs avantages à l'utilisation d'une telle technique indirecte :
L'antigène porte plusieurs anticorps primaire, qui lui