Milieu de culture ekm

Pages: 5 (1106 mots) Publié le: 16 mars 2013
Gélose au vert brillant et au rouge de phénol (EDEL et KAMPELMACHER)

DOMAINE D’UTILISATION La gélose au vert brillant et au rouge de phénol selon Edel et Kampelmacher est un milieu sélectif employé pour l’isolement des salmonelles dans les produits alimentaires, spécialement lorsque ces microorganismes sont présents en petit nombre.

HISTORIQUE C’est en 1925 que Kristensen, Lester etJurgens ont décrit ce milieu dont la formule a été modifiée par Kauffmann, puis au RijksInstituut voor Volksgezondheid en Milieu (R.I.V.M.) sous la conduite de Edel et de Kampelmacher, près d’Utrecht.

PRINCIPES - L’inhibition de la flore à Gram positif et de la plupart des germes à Gram négatif est due à la présence de vert brillant. - Par rapport au milieu de Kristensen, le milieu a étéenrichi en facteurs nutritifs et le pouvoir inhibiteur a été amoindri. - Le milieu contient deux glucides : le lactose et le saccharose, pour lesquels la fermentation de l’un ou l’autre ou des deux se traduit par un abaissement de pH qui provoque l’apparition de colonies colorées en jaune vert en présence de l’indicateur de pH, le rouge de phénol. - Les salmonelles lactose-négatifs produisentdes colonies incolores à rosâtres. - Il est particulièrement recommandé de réaliser au préalable un enrichissement sur un milieu au tétrathionate, sur un bouillon sélénite-cystine ou bien sur un bouillon de Rappaport-Vassiliadis et d’ensemencer simultanément d’autres milieux plus sélectifs : gélose de Wilson-Blair modifiée, gélose XLT4 ou COMPASS® Salmonella Agar.

PREPARATION - Mettre ensuspension 53,7 g de milieu déshydraté (BK091) dans 1 litre d’eau distillée ou déminéralisée. - Porter lentement le milieu à ébullition sous agitation constante et l’y maintenir durant le temps nécessaire à sa dissolution. - Répartir en tubes ou en flacons. - Ne pas autoclaver.

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MODE D’EMPLOI Refroidir et maintenir le milieu à 44-47°C. Couler en boîtes de Petri stériles. Laisser solidifier sur une surface froide. Faire sécher les boîtes à l’étuve, couvercle entrouvert. Ensemencer en stries l’inoculum dans les boîtes, à partir des milieux d’enrichissement utilisés pour larecherche des Salmonella. - Transférer parallèlement l’inoculum sur un autre milieu sélectif. - Incuber à 37°C pendant 24 à 48 heures si nécessaire.

LECTURE L’aspect des colonies est le suivant : Caractéristiques Colonies incolores à roses entourées d'une zone rouge dans le milieu Colonies roses, sans prolifération Petites colonies roses Colonies jaune verdâtre, entourées d'une zone jaune dansle milieu Cultures totalement, ou presque totalement inhibées Microorganismes Salmonella (lactose/saccharose-négatif) Proteus Pseudomonas Escherichia, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter (lactose/saccharose-positif) Bactéries à Gram positif

FORMULE - TYPE (pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales) Pour 1 litre de milieu : - Tryptone.........................................................................................10,0 g - Extrait de viande ..............................................................................5,0 g - Extrait autolytique de levure.............................................................3,0 g - Lactose ..........................................................................................10,0 g - Saccharose....................................................................................10,0 g - Phosphate disodique .......................................................................1,0 g - Phosphate monosodique .................................................................0,6 g - Rouge de phénol.........................................................................90,0 mg - Vert brillant...
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