Mise en lame et lamelle de prélèvement

643 mots 3 pages
Compte rendu de physiologie animal

Étapes
Manipulation
Matériel/Produit
Justification
Prélèvement des pièces
Tuer la souris sous cloche
Cloche à CO2
Privation du O2 nécessaire au fonctionnement de l'organisme, provoque la mort par asphyxie sans dégâts sur les organes

Prélèvement des organes
Ciseaux, pince à dissection, sonde cannelé
Doit avoir lieu directement après la mort sous risque d’auto dégradation des tissus

Nettoyage
Eau physiologique (H2O et NaCl)
Le NaCl, isotonique au sang, permet de réguler la pression osmotique des cellules (sinon explosion). Élimination des impuretés

Fixation de l'organe dans le liquide de Bouin
Pilulier, Liquide de Bouin (acide picrique, formol, acide acétique)
L'acide picrique durcit les organes ce qui permet de conserver les structures et le formol joue le rôle d'antiseptique. Ainsi on évite l'autolyse cellulaire par les enzymes et la putréfaction par les bactérie.
Inclusion des pièces
Déshydratation (1 jour dans alcool à 75%, 2h dans l'alcool à 95% et 1h dans l'alcool à 100%)
Alcool à 75%, 95% et 100%
Les tissus contiennent de l'eau hors la paraffine est hydrophobe, donc on remplace l'eau des cellules par un liquides hydrophobe et miscible avec la paraffine: l'alcool, par bains de degré croissant.

Pénétration par un liquide intermédiaire
Butanol
Transition car le butanol est miscible avec la paraffine et l'alcool mais pas avec l'eau.

Pénétration par la paraffine
Paraffine chaude (56°C)
La paraffine est liquide au dessus de 56°C ce qui est nécessaire pour couler le future bloc, et elle est miscible avec le butanol.
Mise en bloc
Placement de l'organe dans la paraffine coulée dans les barres de Lauckart
Barres de Leuckart, Paraffine chaude, plaque de verre, pince
La paraffine à température ambiante devient solide, elle permet ainsi de donner de la solidité aux organes et leur conservation morphologique pour pouvoir faire les coupes.
Coupe du bloc et mise du ruban sur la lame
Découpage d'un trapèze autours de l'organe

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