Analyse d’échantillons alimentaires pour la présence d’organismes génétiquement modifiés

Module 4
Extraction et purification de l’ADN

M. Somma

WORLD HEALTH ORGANIZATION
REGIONAL OFFICE FOR EUROPE
WELTGESUNDHEITSORGANISATION
REGIONALBÜRO FÜR EUROPA

ORGANISATION MONDIALE DE LA SANTE
BUREAU REGIONAL DE L'EUROPE
ВСЕМИРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ
ЕВРОПЕЙСКОЕ РЕГИОНАЛЬНОЕ БЮРО

Extraction et purification de l’ADN

2

Table des matières
Module 4
Extraction et purification d’ADN

INTRODUCTION

3

METHODES D’EXTRACTION

4

METHODES DE PURIFICATION

4

METHODE D’EXTRACTION ET DE PURIFICATION AU CTAB

6

QUANTIFICATION DE L’ADN PAR SPECTROPHOTOMETRIE

9

PRINCIPES DE LA DETERMINATION SPECTROPHOTOMETRIQUE DE L’ADN

10

DETERMINATION DE LA CONCENTRATION EN ACIDES NUCLEIQUES

11

EXPERIENCE

14

REFERENCES

18

Analyse d’échantillons alimentaires pour la présence d’organismes génétiquement modifiés

Module 4

Extraction et purification de l’ADN

3

Introduction
L’extraction et la purification des acides nucléiques sont les premières étapes dans la plupart des études de biologie moléculaire et dans toutes les techniques d’ADN recombinant. L’objectif des méthodes d’extraction des acides nucléiques dans le cas présent est d’obtenir des acides nucléiques purifiés, tirés de sources diverses, afin de pouvoir mener une analyse spécifique de détection d’OGM en utilisant la réaction de polymérisation en chaîne (PCR). La qualité et la pureté des acides nucléiques comptent parmi les facteurs les plus critiques pour l’analyse PCR. Afin d’obtenir des acides nucléiques hautement purifiés exempts de tout contaminant visibles, des méthodes d’extraction adéquates devraient être appliquées. Les contaminants susceptibles d’inhiber la réaction PCR sont énumérés dans le Tableau 1. Afin d’éviter un résultat « faux-négatif » du fait de la présence d’inhibiteurs de PCR dans l’échantillon, il est vivement recommandé de réaliser une expérience de contrôle visant à tester l’inhibition de la PCR.