IFTAB II

EXERCICES D’ENZYMOLOGIE
Exercice 1 : CALCUL D’ACTIVITES La lactase hydrolyse le lactose en glucose et galactose. On détermine la vitesse d’hydrolyse du lactose par la lactase (β-galactosidase) (E.C. 3.2.1.23) dans les conditions initiales. Il apparaît 0,672x10-2 moles de glucose en 10 minutes. On a introduit dans le milieu 1 mL de solution enzymatique dont la teneur en protéines est de 2,85 g.L-1. a) Ecrire l’équation de la réaction b) Que signifie le terme « conditions initiales », Préciser les conditions de concentrations en substrat. c) Calculer la concentration d’activité catalytique de la préparation en enzymatique en UI.mL-1 et en Kat.mL-1 d) Calculer l’activité spécifique de l’enzyme en UI.mg-1 et en Kat.mg-1 e) Calculer l’activité molaire spécifique en considérant que l’on est en présence d’une enzyme pure.(PM = 135000 Da) Exercice 2 : CALCUL D’ACTIVITES Une enzyme E est constitué de 2 sous-unités identiques de poids moléculaires voisins de 50 000 Da .La réaction catalysée est : E S P On dispose d'un extrait de E contenant 3 mg de protéines par mL et dans lequel I'enzyme est pure à 80 %. La détermination d'activité est réalisée par spectrophotométrie à 512 nm, longueur d'onde à laquelle le produit P absorbe mais non le substrat S. Le coefficient d'absorption molaire du produit est égal dans les conditions de la mesure à 5 000 mol-1.L.cm-1. La cuve utilisée a une largeur de 1 cm. Le milieu réactionnel, tamponné à pH 7 et thermostaté à 30 °C, contient une concentration saturante en substrat. Son volume est de 3 mL. On utilise pour la détermination 100 µL d'extrait de E diluée au 500ème. On arrête la réaction en ajoutant 2 ml de réactif d'arrêt au milieu réactionnel après 2 minutes de temps de réaction. La variation d'absorbance lue est égale à 0,6 unité d'absorbance. Calculer la concentration d'activité catalytique dans l'extrait E et l'activité spécifique. En déduire le Turn Over Number à 30 °C et pH 7. Exercice 3 : Etude cinétique d’une enzyme