Alice Atger
Laurène Bach
Série 1

Culture
Cellulaire

Introduction

La culture cellulaire est une technique de laboratoire permettant le maintien en vie et la multiplication de cellules en conditions in-vitro dans un but d'expérimentation scientifique.
Lors de ce TP, nous allons utiliser une méthode de culture monocouche en utilisant la ligné U2-OS, cellules adhérentes dérivées d'un ostéosarcome humain.
L'objectif de cette méthode est d'effectuer un test de toxicité de l'Actinomycine D, antibiotique peptidique issu de streptomycètes, bloquant la transcription de l'ADN en ARN messager.
Pour cela, nous préparerons dans un premier temps les cellules afin de les décoller de la paroi de la flasque pour ensuite évaluer la toxicité en dosant des concentrations croissantes d'Actinomycine D.

I/ Méthodes et matériel
1) Préparation des cellules

Au début du TP, les cellules adhérentes se trouvent sur la paroi d'une flasque. Il faut donc les préparer pour effectuer le test par la suite.

COMPTAGE :

58 cellules sur deux lignes
10 lignes en tout
Or la zone de comptage représente 1 µL
Ainsi pour avoir le nombre de cellules par mL : 58x10x103
Or les 50µL de bleu de Trypan ont dilué nos cellules au demi.

Donc on a finalement : 58x10x103x2= 5,8 x 105 cellules / mL

On fait la moyenne des 2 résultats du binôme : 5,8 . 105+ 6 ,0 . 105 = 5,9 x 105 cellules / mL 2

2) Préparation des dilutions d'Actynomycine D à tester

Nous allons maintenant préparer les différentes dilutions d'actinomycineD avec la suspension cellulaire concentrée à 2,6 105 cellules / mL.

Chaque puits contient 100 µL avec une concentration en actinomycine variable et une concentration en cellules constante.
Nous avons 6 concentrations différentes à tester, il nous faut donc 6mL de cellules.
On en