PLA Pierre, GARCIA Laura, RÉGIBIER Etienne 05/10/2022
Prélèvement d’hémocytes chez l’huître creuse (Crassostrea gigas sp) Introduction L’huître creuse Crassostrea gigas est un mollusque bivalve vivant fixé aux roches et demandant une eau ayant un faible taux de salinité et dont les larves sont planctoniques.
Se nourrissant en filtrant l’eau de mer grâce à une filtration réalisée par les branchies, elle est un bon indicateur de la mauvaise qualité de l’eau, mais elle peut se protéger …afficher plus de contenu…

Les huîtres ont d'abord été nettoyées à l’eau du robinet avec une brosse puis ont été mise dans un bain d’alcool pendant 2 minutes. Elles ont ensuite été ouvertes avec un couteau à huîtres et un scalpel tout en étant équipé de gants en latex et de papier absorbant.
Les 1mL d’Hémolymphe ont été prélevé à l’aide d’une seringue et une aiguille stérilisée d’1 mL. Les 3mL d’Hémolymphe récoltés sur les trois huîtres ont été placés dans un tube à fond conique de 15mL placé dans de la glace pillée à 4°C.
Un prélèvement d’1 mL d’hémolymphe a été déposé dans la colonne d’une Cytocentrifugeuse qui a tournée à 500 tpm pendant 15min à 4°C.
Le tube conique a lui été mis dans une centrifugeuse qui a tournée à 2000 tpm pendant …afficher plus de contenu…

Un marquage coloré a été effectué sur les deux lames à l’aide d’un Kit Hemacolor Merck. Les lames ont été placé dans 4 bains successifs, dans une première solution fixative Hemacolor pendant 5s, dans la seconde qui sert de réactif de coloration rouge pendant 3s, dans la troisième solution qui est un réactif de coloration bleue pendant 6s et dans une dernière solution qui sert de tampon de lavage PBS pendant 45s.
Les deux lames ont ensuite été observées au microscope optique et les résultats ont été analysés. Résultats
Photo d’observation d’hémocytes d’huître creuse au microscope optique (grossissement
X1000) après cytocentrifugation. Figure 1 : Photo d’une observation au microscope optique à l’objectif X1000