2005-2006

L1 - TRAVAUX PRATIQUES DE
BIOCHIMIE STRUCTURALE
La composition en acides aminés (type et nombre d’acides aminés) des protéines est variable d’une protéine à une autre. Il est possible, en réalisant une hydrolyse des liaisons peptidiques par méthode chimique (HCl 6M, 110°C, plusieurs heures), de libérer tous les acides aminés d’une protéine. On peut alors déterminer, par différentes méthodes, la composition en acides aminés de cette protéine. Au cours de ce TP vous allez aborder deux techniques qui servent à obtenir des informations sur la composition en acides aminés d’une protéine :
I- la détermination du nombre d’un acide aminé particulier, la tyrosine, grâce à un dosage spécifique, II- la détermination d’une composition en acides aminés par chromatographie sur couche mince.
Ces deux techniques ne permettent pas, à elles seules, de connaître la composition en acides aminés d’une protéine mais donnent des informations partielles qui rajoutées à d’autres permettrons de connaître cette composition. I- Détermination du nombre de tyrosine de la caséine β à partir du dosage dans un hydrolysat de la tyrosine libre
A- Principe du dosage de la tyrosine par le réactif de Folin-Ciocalteu
La caséine β est une protéine issue du lait. Sa masse moléculaire est d’environ 25,0 kDa. Un hydrolysat de caséine a été obtenu par hydrolyse acide. Cet hydrolysat contient environ 40 % d’acides aminés libres, le reste est constitué de peptides non totalement hydrolysés.
Afin d’évaluer le nombre de tyrosine contenues dans la caséine β, on réalise un dosage de cet acide aminé à l’aide du réactif de Folin-Ciocalteu à partir d’une solution d’hydrolysat de caséine. En milieu alcalin le réactif de Folin Ciocalteu (complexe phosphomolybdique-phosphotungstique) est réduit par le noyau phénolique des résidus de tyrosine libres. Cette réaction donne une coloration bleue permettant un dosage colorimétrique.
Pour quantifier la quantité de tyrosine libre de