Purification d'un anticorps monoclonal spécifique d'une proteine rho

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I. Introduction.

Le laboratoire d’accueil fait partie de l’Inserm plus précisément de l’U563. L’équipe dans laquelle j’ai été accueillie a pour thématique : « Signalisation, GTPases Rho et Cancer ».

L’équipe du Pr Favre de l’unité Inserm U563 s’intéresse à l’implication des petites GTPases, et plus particulièrement des petites GTPases de la sous-famille Rho, dans les processus de cancérisation. En effet ces protéines, sont impliquées dans les processus intervenants dans la progression tumorale et la formation des métastases telle que la régulation du cytosquelette, la progression du cycle cellulaire et les recyclages des récepteurs de facteurs de croissance notamment.

Afin de localiser et de mesurer l’activation des GTPases Rho dans les tissus sains et cancéreux, l’équipe travaille à la mise au point de fragments d’anticorps monoclonaux recombinants, capables de se lier à ces GTPases lorsqu’elles sont dans leur conformation active. C’est dans cette optique que j’ai travaillé sur la validation et la caractérisation des fragments d’anticorps monoclonaux spécifiques de la conformation active des petites Rho GTPases.

II. Généralité sur les proteines Rho et sur les scFv.

1. Les petites GTPases Rho

Les petites GTPases Rho sont de petites protéines qui hydrolysent le GTP en GDP passant ainsi d’une forme active (GTP) à une forme inactive (GDP). Ces protéines ont une faible masse moléculaire, entre 20 et 40 KDa, et sont retrouvées dans toutes les cellules eucaryotes.

La famille des protéines Rho comporte environs 20 protéines différentes divisées en quatre groupes parmi lesquels le groupe I qui contient les trois protéines RhoA, RhoB et RhoC qui nous intéressent particulièrement.. La première des trois, Rho A, fut identifiée en 1985. Ce sont des protéines de petite taille (autour de 21 kD) et partagent une homologie de séquence peptidique proche de 85%. Elles sont composées de plusieurs domaines, notamment les domaines appelés Switch I et

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