Silencing activity of 2’-O-methyl modified antiMDR1 siRNAs with mismatches in the central part of the duplexes
Natalya S. Petrova, Mariya I. Meschaninova, Alya G. Venyaminova,
Marina A. Zenkova, Valentin V. Vlassov,
Elena L. Chernolovskaya
N.S. Petrova et al. / FEBS Letters 585 (2011) 2352–2356

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Plan:
 Quelques définitions
 Objectifs de l’étude
 Matériels et méthodes utilisés

 Résultats
 Discussion
 Conclusion
 Perspective

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Définitions
ARNsi:
 ARN simple ou double brin dont l’interférence avec ARNm spécifique conduit à sa dégradation et à la diminution de sa traduction en protéines. Il se lie de façon spécifique à une séquence d’ARNm et empêche l’expression de gènes en clivant cet ARN.

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Complexe RISC
 Le complexe RISC (RNA-induced silencing

complex) est un complexe multi-protéique essentiel, qui joue un rôle central dans le phénomène d'interférence par ARN. Il permet, par le guidage de petits ARN non codant (endogènes ou étrangers), de réguler l’expression de nombreux gènes. On estime en effet que la moitié des gènes du génome humain sont régulés par cette machinerie cellulaire.

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Interférence ARN

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Objectifs & stratégies
Etude de l’impact de la déstabilisation du duplexe par substitution de nucléotides dans la partie centrale de siARN anti-MDR1 sur son activité d’inhibition.
2 cas étudiés:
-Culture cellulaire humaine HEK 293
-Multiple lignée cellulaire humaine : KB-8-5

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Matériels & méthodes
 Synthèse de l’siARN et trempage du duplexe

 Culture cellulaire
 Transfection de ARNsi dans les cellules
 Western Blot

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Synthèse de l’siARN et trempage du duplexe
 Synthèse siARN:

Dans automate ASM-800DNA/RNA synthétiseur
Utilisation de ribo et 2’-0-methylribo b-cyanocethy phosphoramides
 Puis oligoribonucléotides sont:

Déprotégé
Purifié par dénaturation PAGE et isolé
 Puis trempage:

Duplexe ARNsi trempé dans tampon de trempage à 10uM
Stocké à -20°C
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