TD comm cell 2020-2021.pubE������� 1 : Le virus SV40 est un virus à ADN qui infecte les singes de type Rhésus et peut provoquer l’appari)on de tumeurs.
Il est u)lisé en recherche et en biotechnologie pour la créa)on de lignées cellulaires immortalisées c’est-à-dire capables de se mul)plier en culture indéfiniment. Son pouvoir immortalisant est lié à l’expression de plusieurs protéines dont l’une est appe- lée Protéine « Grand T ». Afin de comprendre le mode d’ac)on de Grand T, des expériences …afficher plus de contenu…

Les protéines des essais 1 et 3 et seulement celles des microsomes des essais 2 et 4 ont été ana- lysées par PAGE-SDS et autoradiographie. Le résultat est présenté fig. 1:
2. Après ceOe expérience in vitro, les chercheurs ont mené une expérience in vivo en introduisant directement les ARN messa- ger codant la Protéase D dans le cytoplasme des ovocytes de Xenopus (l’ovocyte est une grosse cellule de 1 mm de diamètre des)née à former l’ovule de ce batracien. Du fait de sa taille, elle cons)tue un bon modèle cellulaire pour des études in vivo.)
L’expression de la Protéase D a été suivie dans ceOe cellule au cours du temps grâce à une expérience de pulse-chasse en pré- sence de leucine tri)ée : après introduc)on des ARNm, les cellules ont été incubées 3 min en présence de [ …afficher plus de contenu…

5. Finalement, le plasmide d’expression de protéase D permeOant la synthèse des ARNm a été modifié : les nucléo)des codant la séquence KDEL ont été ajoutés en 3’ de la séquence codante de Protéase D de façon à produire une protéine ayant la sé- quence KDEL en Cter. Toutes les expériences précédentes décrites ont été réalisées. Les résultats sont les suivants :
- Les résultats présentés en Fig.1 et 2 restent inchangés avec Protéase D-KDEL.
- Tableau I : Toute la radioac)vité reste dans les cellules et aucune radioac)vité significa)ve n’est trouvée dans le milieu d’incu- ba)on - Fig. 3 : Presque 100% des grains d’argent restent associés au compar)ment 1. Quelques grains sont visibles sur le