TP 2 Biochimie expérimentale 1 :
Spécificité des actions enzymatiques : les glycosidases

Dans ce TP notre objectif est de déterminer la structure d’un diholoside (holoside constitué de 2 oses) inconnu par l’action de glycosidases et de la liqueur de Fehling par la mise en évidence ou non du pouvoir réducteur du diholoside.

Les glycosidases sont des exo-enzymes qui catalysent la coupure de la liaison osidique R1-O-R2 par les extrémités des osides en libérant au moins un ose.

Une osidase est spécifique d’un ose, d’une forme cyclique (pyrane ou furane) et d’un anomère α ou β.
La Chromatographie sur Couche Mince (CCM) est une chromatographie d’adsorption qui repose sur la séparation des composés en fonction de la polarité dans une cuve où l’on y dépose une phase stationnaire (gel de silice polaire) et une phase mobile (mélange de solvant moins polaire). Le solvant migre sur la plaque par capillarité et si la force d’adsorption est supérieure à la force de migration le composé migre peu car il a plus d’affinité avec la phase stationnaire, il fixe le support et inversement si la force de migration est supérieure à la force de d’adsorption le composé migre loin car il a plus d’affinité avec la phase mobile. Enfin, on révèle et on identifie les composés par rapport à la migration de témoins connus. Ensuite on peut calculer les rapports frontaux qui sont égaux à la distance de migration entre la zone de dépôt et la tache sur la distance de migration du solvant entre la zone de dépôt et le front de migration. Rf=d/D
La liqueur de Fehling permet de mettre en évidence le pouvoir réducteur d’un oside c’est-à-dire si celui-ci contient une fonction carbonyle (aldéhyde ou cétone) libre qui réduira la liqueur de Fehling (gain d’électron).
Dans une liaison osidique, un ose implique forcément son OH anomérique mais le deuxième sucre peut impliquer n’importe lequel de ses groupes hydroxyles et pour que la liqueur de Fehling soit réduite il faut au moins qu’un ose ait