Tp biochimie les molécules de la vie

Pages: 6 (1463 mots) Publié le: 13 décembre 2012
MANIPULATION I : Introduction à la manipulation biologique

Introduction
Ce TP se déroule en 3 parties : la pesée et la mesure de volume, la dilution et la préparation d’une solution tampon.
Les solutions tampons sont très communément et universellement employé en biochimie car elles ont pour rôle d’assurer aux molécules biologiques, un milieuadéquat en terme de concentration ionique et pH principalement.
But
Se familiariser avec du materiel utilisé dans les laboratoires de biologie, de faire quelques calculs et d’apprendre les gestes les plus simples tel sue le pipetage, le mélange de solution et la pesée.
Principe
A. Pesée et mesure de volume
Une pesée peut être faite dans un bécher ou une coupelle. Une mesure de volumedoit être faite à l’aide d’une pipette, d’une éprouvette u d’une fiole jaugée, cela dépend de la précision demandée.
Nous allons préparer 20 mL d’une solution 10 % saccharose et 0.01 % bleu de bromophénol (BBP). La concentration est exprimée en concentration massique pondérale/
B. Dilution
On a une solution de approximativement 0.3 M en saccharose et à partir de cette solution on en veut 3, unede 0.15 M une 0.06 M et une de 0.016 M en saccharose. (Le BBP sera aussi dilué il faut donc calculer sa concentration molaire et pondérale). On peut obtenir ces solutions par dilutions directes soit par une série de dilutions en cascades.

Dilutions directes :
Concentration finale souhaitée | Volume de solution à 0.3 M (µL) | Volume H2O QSP 1 mL (µL) | Facteur de dilution |
0.15 M |500 | 500 | 2 |
0.06 M | 200 | 800 | 5 |
0.015 M | 50 | 950 | 20 |

Dilution en cascade :
Concentration finale souhaitée | Volume de solution à 0.3 M (mL) | Volume d’eau QSP 5 mL | Facteur de dilution |
0.15 M | 2.5 | 2.5 | 2 |
Concentration finale souhaitée | Volume de solution à0.15 M | Volume d’eau QSP 5 mL | Facteur de dilution |
0.06 M | 2 | 3 | 2.5 |
Concentrationfinale souhaitée | Volume de solution à 0.06 M | Volume d’eau QSP 5 mL | Facteur de dilution |
0.015M | 1.25 | 3.75 | 4 |

C. Préparation d’une solution tampon
Dans la zone de pH comprise entre 6 et 8 on peut utiliser comme solution tampon un mélange mono et de dihydrogénophosphate de sodium.
mmonohydrogénophosphate de sodium = n x M = 7.5 .10-3 x 3.58 = 2.685 gmdihydrogénophosphate de sodium = 7.5 .10-3 x 156 = 1.17 g
Equation d’Henderson – Hasselbach : pH = pK2 + log [HPO4 2-] [H2PO4 - ]
On effectue le mélange des deux constituants à la même concentration en suivant l’évolution du pH avec un pH-mètre, de façon à pouvoir modifier les volumes de solutions à utiliser si cela est nécessaire pour obtenir le pH choisi.Mode opératoire
A. Pesée et mesure de volume
Peser 2g de saccharose dans un bécher. Dissoudre la poudre dans 16 mL d’eau déminéralisée. Ajouter 1 mL de solution à 0.2 % de BBP. Verser la solution dans une éprouvette et ajuster le volume à 20 mL avec unepissette d’eau. Remettre dans le bécher pour mélanger.
B. Dilution
Prélever un volume de solution mère Introduire le prélèvement dans une fiole jaugé Ajouter de l'eau distillée au ¾Boucher, homogénéiser Compléter avec de l'eau distillée jusqu'au trait de jauge Boucher, homogénéiser

C. Préparation d’une solution tampon
Préparer séparément 250 mL de solution aqueuse 0.3 mol.L-1 dihydrogénophosphate de sodium et 250 mL de monohydrogénophosphate de sodium de même concentration....
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