La technique ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) est une technique immuno-enzymatique de détection qui permet de visualiser une réaction entre un antigène et un anticorps grâce à une réaction colorée produite par l'action sur un substrat d'une enzyme préalablement fixée à l'anticorps.
C'est un test très utilisé en immunologie pour détecter la présence d'un anticorps ou d'un antigène dans un échantillon. Elle comprend plusieurs méthodes :

La méthode directe du test ELISA qui consiste à fixer des antigènes présents dans un échantillon à doser sur la paroi d'un puit, puis de révéler cet antigène par un anticorps marqué. La méthode indirecte, est celle que nous allons utiliser, est différente de la méthode directe, il s'agit d'une méthode en sandwich. Dans cette méthode, l'anticorps va être fixé spécifiquement sur des antigènes tapissant un puit et révélé par un second anticorps de détection couplé à une enzyme qui permet la coloration d'un substrat.
Dans notre cas, nous allons chercher à détecter des anticorps de lapin anti-BSA.

Quel est l'intérêt de cette technique sandwich dite 'indirecte' par rapport à la méthode directe ? (question 7) La méthode directe est une technique qui ne comprend qu'un anticorps de détection, c'est-à-dire que l'on peut doser l'antigène, tandis que la méthode indirecte va mettre en jeu deux anticorps, dont comme dans la méthode directe, un anticorps de détection. Ce qui est plus intéressant dans la méthode indirecte est le fait d'utiliser un premier anticorps spécifique à l'antigène présent. Ainsi le phénomène de spécificité est présent plus fortement dans la méthode indirecte.

Dans un sérum de lapin, nous allons rechercher un anticorps contre la BSA, c'est-à-dire, la sérum albumine bovine.

I-Matériels et méthodes
1) Liste du matériel

Avant toute manipulation, nous avons besoin sur notre paillasse :

de pipettes et multipipettes, des microtubes et des portoirs,
Trois barettes de microtitration,
un