Tp lysozyme

1169 mots 5 pages
I/ Introduction :
Le lysozyme est une protéine globulaire de 129 AA. C'est une hydrolase acide secrétée par les granulocytes et les monocytes, appartenant à la famille des O-glycosyl hydrolases.
Il est retrouvé chez les mammifères dans différentes secrétions (urine, salive, larme, lait), dans le sérum et dans le blanc d’œuf où il permet la nutrition du poussin en développement.
Le lysozyme détruit la paroi bactérienne en catalysant l'hydrolyse des peptidoglycanes de cette dernière et constitue ainsi une de nos défenses naturelles contre les infections. Cette propriété à incité certains auteurs à le qualifier d'antibiotique corporel.
Une purification du lysozyme à partir du blanc d’œuf est possible.

1- On procède à la fixation des protéines du blanc d'oeuf sur la colonne, on récupère tout ce qui n'est pas fixé, le surnageant, qui sera notre solution F1.
2- On réalise deux lavages permettant d'éluer ce qui a été fixé de manière non covalente à la colonne, seul le lysozyme devrait rester accroché. On récupère ici encore les surnageants à chaque étape de lavage qui constitueront nos solutions F2et F3.
Lors d'un troisième lavage, on mesure la densité optique à 280nm au fur et à mesure que l'on ajoute du tampon, cela nous permet de savoir à quel moment les protéines sortent de la colonne. Lorsque la densité optique devient nulle ou constante cela signifie que tout à été décroché.
3- Enfin, on effectue une élution grâce à un tampon afin d'obtenir notre solution E contenant normalement le lysozyme purifié.

II/ Matériel et Méthodes :
Extraction du lysozyme Fixation du lysozyme sur la CM cellulose
Dans un premier temps, on place les tubes de récupération des différentes fractions dans de la glace.
Un blanc d’œuf, récupéré dans un bécher, est dilué dans 200ml de tampon glycine ph10. Après un filtrage au travers d'une gaze on récupère le filtrat M dans une éprouvette graduée. Chaque binôme travaille avec 10ml de ce filtrat M placé dans la glace.
On place

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