cCOMPTE RENDU DE TP MICROBIOLOGIE
*Préparation des milieux solides pour faire pousser des bactéries.
On a préparé les milieux suivants :

Milieux préparés : Cetrimide Chapman TS

*Dénombrement direct à la cellule de thoma
La solution bactérienne a été étudiée au microscope sur la cellule de Thoma . 0,1ml 0,1ml cellule de thoma V=16x1/20x1/20x0,1= 4x10-6mm³=4x10-6 ml Solution Mère 10-1 10-2 On a obtenu en moyenne N= 52 cellules (43,53,44,64,34,68,65,46) Concentration de cellules dans la solution C= N/V avec V = volume de la cellule de thoma C= 5200/4x10-6 = 1,3X109cellules/ml

*Dénombrement indirect dilution 10-2

1 ml

1 ml

1 ml

1 ml

10-3

10-4

10-5

10-6

10-7

Pour obtenir un nombre de cellules compris entre 30 et 300, on a fait une galerie de dilutions à partir de C jusqu’à 1O-7 pour avoir 13 cellules.

*Isolement en stries ( non quantitatif)
On réalise ensuite des isolements en stries qui vont nous permettre d’isoler des colonies.

10-5 Cellules obtenues après dilution : 216 Concentration en dénombrement indirect : Concentration en dénombrement direct :

10-6 8

10-7 1

216x105x10=2,16x108 CFC/ml 1,3x109 cellules /ml

Le dénombrement direct est supérieur au dénombrement indirect car dans la cellule de thoma on compte les colonies mortes et vivantes.

*Observation des résultats
Milieu non sélectif TS
5g/l NACl

Milieux sélectifs Chapman
75g/l NACl

Cetrimide

G grande colonie P P petite Colonie *Colorations de GRAM
Fixation Violet de Gentiane

1 seul type de colonie

G

P halotolérante

G cetrimide résistant *Coloration simple au violet
Fixation Violet De Gentiane

Lugol Décoloration

P Coque G Bacille Par déduction : P Gram+ et G Gram-

Safranin

G Rose Gram – P Violet Gram +